[發(fā)明專利]一種從樟芝菌固態(tài)發(fā)酵粉中提純安卓奎諾爾的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410323967.3
• 申請(qǐng)日: 2014-07-08
• 公開（公告）號(hào): CN104130113A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許贛榮;路瑞秋;張薄博
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C07C45/78
• 分類號(hào): C07C45/78;C07C45/79;C07C49/753
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種從樟芝菌固態(tài)發(fā)酵粉中提純安卓奎諾爾的方法，屬于生物制藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)

安卓奎諾爾，英文名稱為(Antroquinonol)，是一種潛在的抗癌藥物。安卓奎諾爾是發(fā)現(xiàn)于牛樟芝子實(shí)體中的化合物，分子式C₂₄H₃₈O₄，分子量為390g/mol。純化的安卓奎諾爾為淡黃色油狀，具有低水溶性之特性(<0.1mg/ml)，具有高度穩(wěn)定性，可于室溫(25℃)或低溫環(huán)境(4℃)維持穩(wěn)定性至少長(zhǎng)達(dá)24個(gè)月。

生理活性物質(zhì)安卓奎諾爾是2007年Lee等人利用正己烷從樟芝子實(shí)體中萃取并鑒定一種新化合物，屬于泛醌類的衍生物。2010年Chiang等人研究表明安卓奎諾爾可以通過活化AMPK來抑制胞內(nèi)蛋白質(zhì)的合成途徑，進(jìn)而抑制細(xì)胞周期，從而產(chǎn)生抗癌效果。2012年Tsai等研究發(fā)現(xiàn)安卓奎諾爾具有抗氧化應(yīng)激和抗炎等活性。由于安卓奎諾爾具有顯著的抗癌活性，并且，它對(duì)于癌細(xì)胞與正常細(xì)胞具有選擇性，目前已進(jìn)入FDA二期臨床實(shí)驗(yàn)，是具有優(yōu)良前景的抗癌化合物。

高純度的安卓奎諾爾不僅在保健品、醫(yī)藥領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用潛力，而且對(duì)于其生理功能方面的深入研究具有很重要的價(jià)值。目前，安卓奎諾爾的提純僅以牛樟芝的菌絲體為原料，采用柱層析結(jié)合半制備色譜的方法進(jìn)行提純，但安卓奎諾爾的純度仍不高，不能達(dá)到做參照標(biāo)準(zhǔn)品的要求。本發(fā)明以樟芝固態(tài)發(fā)酵粉為原料，制備獲得了高純度的安卓奎諾爾。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種從樟芝固態(tài)發(fā)酵粉中提純安卓奎諾爾的方法，以樟芝菌固態(tài)發(fā)酵粉末為原料，通過萃取、濃縮除雜、一次柱層析、半制備色譜、二次柱層析、濃縮等步驟，得到高純度的含安卓奎諾爾的產(chǎn)品。

所述方法主要包括以下步驟：

(1)萃取：將樟芝固態(tài)發(fā)酵粉末，以無水乙醇反復(fù)浸提多次，然后合并濾液得到安卓奎諾爾粗提濃縮液；

(2)濃縮除雜：除去步驟(1)粗提濃縮液中的乙醇，以體積分?jǐn)?shù)50％-90％的乙酸乙酯水溶液反復(fù)萃取3次；收集合并乙酸乙酯相，除去乙酸乙酯，得到濃縮液1；

(3)一次柱層析：柱層析填料為60-80目或100-200目的硅膠，或非極性或中極性的大孔樹脂，采用梯度洗脫，以乙醇水溶液或選自酯類、醇類、烷類或鹵烷所組成的族群中的兩種物質(zhì)混合作為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，洗脫后的流分分段收集，合并含安卓奎諾爾的流分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到濃縮液2；

(4)半制備色譜：將濃縮液2以半制備色譜分離純化，流動(dòng)相為體積分?jǐn)?shù)80-100％的乙腈水溶液，流速：2mL/min，采用普通C18的制備色譜柱，柱溫20-40℃；UV檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；根據(jù)出峰時(shí)間收集物質(zhì)，收集液濃縮后得到濃縮液3；

(5)二次柱層析：柱層析填料為200-300目的硅膠，以選自酯類、醇類、烷類或鹵烷所組成的族群的兩種物質(zhì)混合作為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，洗脫后的流分分段收集；

(6)濃縮：對(duì)收集的含安卓奎諾爾的樣品進(jìn)行常壓濃縮或真空濃縮。

所述方法優(yōu)選以下步驟：

(1)萃取：將安卓奎諾爾含量范圍在300mg/kg～1000mg/kg的樟芝固態(tài)發(fā)酵粉末，按照料液比1g:5mL-1g:15mL的比例加入無水乙醇，20-40℃下，浸提、過濾，反復(fù)3次，然后合并濾液得到安卓奎諾爾粗提濃縮液。

(2)濃縮除雜：在40-50℃下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇得到安卓奎諾爾粗提浸膏，粗提浸膏按1g:5mL-1g:20mL的比例加入50％-90％(v/v)乙酸乙酯水溶液進(jìn)行萃取，靜置分層，萃取3次。收集合并乙酸乙酯相，在40-50℃下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙酸乙酯，得到濃縮液1。

(3)一次柱層析：柱層析填料為60-80目或100-200目的硅膠，或非極性或中極性的大孔樹脂，采用梯度洗脫，以乙醇水溶液或選自酯類、醇類、烷類或鹵烷所組成的族群中的兩種物質(zhì)以體積比0-100％混合作為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，洗脫后的流分分段收集，合并含安卓奎諾爾的流分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到濃縮液2。

(4)半制備色譜：將濃縮液2以半制備色譜分離純化，流動(dòng)相為體積分?jǐn)?shù)80-100％的乙腈水溶液，流速：2mL/min，采用普通C18的制備色譜柱，柱溫20-40℃；UV檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；根據(jù)出峰時(shí)間收集物質(zhì)，收集液濃縮后得到濃縮液3。

(5)二次柱層析：以選自酯類、醇類、烷類或鹵烷所組成的族群的兩種物質(zhì)混合作為洗脫劑，進(jìn)行梯度洗脫，洗脫后的流分分段收集。