[發明專利]一種從樟芝菌固態發酵粉中提純安卓奎諾爾的方法

無效

• 申請號: 201410323967.3
• 申請日: 2014-07-08
• 公開（公告）號: CN104130113A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發明（設計）人: 許贛榮;路瑞秋;張薄博
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07C45/78
• 分類號: C07C45/78;C07C45/79;C07C49/753
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

1.一種從樟芝固態發酵粉中提純安卓奎諾爾的方法，其特征在于，以樟芝固態發酵粉末為原料，通過萃取、濃縮除雜、一次柱層析、半制備色譜、二次柱層析、濃縮得到高純度的含安卓奎諾爾的產品。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)萃?。簩⒄林ス虘B發酵粉末，以無水乙醇反復浸提多次，然后合并濾液得到安卓奎諾爾粗提濃縮液；

(2)濃縮除雜：除去步驟(1)粗提濃縮液中的乙醇，以體積分數50％-90％的乙酸乙酯水溶液反復萃取3次；收集合并乙酸乙酯相，除去乙酸乙酯，得到濃縮液1；

(3)一次柱層析：柱層析填料為60-80目或100-200目的硅膠，或非極性或中極性的大孔樹脂，采用梯度洗脫，以乙醇水溶液或選自酯類、醇類、烷類或鹵烷所組成的族群中的兩種物質混合作為洗脫劑進行梯度洗脫，洗脫后的流分分段收集，合并含安卓奎諾爾的流分，旋轉蒸發得到濃縮液2；

(4)半制備色譜：將濃縮液2以半制備色譜分離純化，流動相為體積分數80-100％的乙腈水溶液，流速：2mL/min，采用普通C18的制備色譜柱，柱溫20-40℃；UV檢測器，檢測波長為254nm；根據出峰時間收集物質，收集液濃縮后得到濃縮液3；

(5)二次柱層析：柱層析填料為200-300目的硅膠，以選自酯類、醇類、烷類或鹵烷所組成的族群的兩種物質混合作為洗脫劑進行梯度洗脫，洗脫后的流分分段收集；

(6)濃縮：對收集的含安卓奎諾爾的樣品進行常壓濃縮或真空濃縮。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(1)將安卓奎諾爾含量為300mg/kg～1000mg/kg的樟芝固態發酵粉末，按照料液比1g:5mL-1g:15mL的比例加入無水乙醇，20-40℃下浸提、過濾，反復3次，然后合并濾液得到安卓奎諾爾粗提濃縮液。

4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于，步驟(2)在40-50℃下真空旋轉蒸發除去乙醇得到安卓奎諾爾粗提浸膏，粗提浸膏與體積分數50％-90％的乙酸乙酯水溶液按1g:5mL-1g:20mL的比例加入乙酸乙酯水溶液進行萃取，靜置分層，萃取3次；收集合并乙酸乙酯相，在40-50℃下真空旋轉蒸發除去乙酸乙酯，得到濃縮液1。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中非極性或中極性的大孔樹脂為HPD100、HPD400、HPD700、HPD750、HPD826或D101。

6.根據權利要求2或5所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)以體積分數為0％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、80％、100％的乙醇水溶液為洗脫劑進行梯度洗脫。

7.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)柱層析填料為60-80目或100-200目的硅膠，以體積分數為0％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、80％、100％的丙酮的苯溶液為洗脫劑進行梯度洗脫。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)柱層析填料為大孔樹脂HPD100或HPD400，水溶液沖洗HPD100或HPD400大孔樹脂后，以流速為0.5BV/h注入安卓奎諾爾濃縮液1，待吸附結束后，用體積分數為0％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、80％、100％的乙醇水溶液為洗脫劑進行梯度洗脫，每個濃度洗脫1個柱體積。

9.根據權利要求2或7所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)柱層析填料為60-80目或100-200目的硅膠，用苯沖洗60-80目或100-200目的硅膠，以流速為0.5BV/h注入安卓奎諾爾濃縮液1，待吸附結束后，用體積分數為0％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、80％、100％的丙酮的苯溶液為洗脫劑進行梯度洗脫，每個濃度洗脫1個柱體積。

10.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(5)柱層析填料為200-300目的硅膠，以體積比70-75∶25-30的苯：甲醇為洗脫劑，以0.6BV/h流速洗脫，洗脫后的流分分段收集。