[發(fā)明專(zhuān)利]一種類(lèi)芽孢桿菌在麩皮培養(yǎng)基生產(chǎn)凝乳酶的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410323806.4
• 申請(qǐng)日: 2014-07-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104059899A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-09-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杭鋒;郭本恒;王欽博;韓瑨;劉振民;陳衛(wèi);宋馨;吳正鈞;張灝
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 光明乳業(yè)股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N9/52
• 分類(lèi)號(hào): C12N9/52;C12R1/01
• 代理公司: 上海弼興律師事務(wù)所 31283
• 代理人: 薛琦;沈利

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種類(lèi)芽孢桿菌(Paenibacillus damxungensis sp.nov.)CGMCC No.8333在麩皮培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)凝乳酶的方法。

背景技術(shù)

近年來(lái)，干酪產(chǎn)業(yè)發(fā)展較快，凝乳是生產(chǎn)原制干酪的關(guān)鍵步驟，凝乳酶在此過(guò)程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，并直接關(guān)系到干酪的品質(zhì)和得率。因而隨著世界干酪產(chǎn)量保持增長(zhǎng)勢(shì)頭，凝乳酶的需求量也不斷增長(zhǎng)。世界上凝乳劑年需求量25×10⁶L，產(chǎn)量占全世界酶制劑總量的20％左右，成為第一大酶制劑。凝乳酶主要功能是專(zhuān)一性的水解乳中κ-酪蛋白多肽鏈，形成副酪蛋白及親水性的糖巨肽，當(dāng)酪蛋白被水解到一定程度后，體系中的鈣離子通過(guò)酪蛋白膠粒間形成的化學(xué)鍵形成凝塊，以此用于干酪生產(chǎn)。

傳統(tǒng)的凝乳酶來(lái)源于小牛皺胃，然而自1961年以來(lái)，世界干酪產(chǎn)量大約增加了3.5倍，小牛皺胃凝乳酶供應(yīng)量卻呈下降趨勢(shì)，目前，世界小牛皺胃凝乳酶的僅能滿(mǎn)足世界干酪產(chǎn)量所需凝乳酶的20～30％，無(wú)法滿(mǎn)足快速增加的干酪產(chǎn)量的需求。因此必須通過(guò)微生物發(fā)酵的方式以獲得凝乳活力高的提取物。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)于微生物源凝乳酶也有部分的研究。如孫健等利用60Co-γ射線誘變初篩的產(chǎn)凝乳酶霉菌，最終獲得提取物凝乳酶的活力為4000SU/mL。郭光遠(yuǎn)等篩選了高溫鏈霉菌凝乳酶活性較高的為100SU/mL。丁明亮等利用枯草芽孢桿菌進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)生凝乳酶，通過(guò)響應(yīng)面法進(jìn)行優(yōu)化，最終獲得凝乳活性最高為1129SU/mL，但其所獲得的凝乳酶活性仍比較有限。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)目前微生物來(lái)源凝乳酶活力(milk clotting activity,MCA)不高、產(chǎn)量較低的缺陷，提供一種微生物來(lái)源凝乳酶的生產(chǎn)方法。本發(fā)明所述的方法采用類(lèi)芽孢桿菌(Paenibacillus damxungensis sp.nov.)CGMCC No.8333在麩皮液體培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)凝乳酶，并且在較佳的培養(yǎng)條件下，獲得的凝乳酶具有高于現(xiàn)有利用微生物發(fā)酵產(chǎn)生凝乳酶的MCA值。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案來(lái)解決上述技術(shù)問(wèn)題：

本發(fā)明的技術(shù)方案為：

一種類(lèi)芽孢桿菌(Paenibacillus damxungensis sp.nov.)CGMCC No.8333在麩皮培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)凝乳酶的方法，包括以下步驟：將類(lèi)芽孢桿菌CGMCC No.8333種子液接種于麩皮培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵，以250mL錐形瓶為標(biāo)準(zhǔn)裝液量為20～40mL，發(fā)酵溫度為28℃～32℃，發(fā)酵時(shí)間為16～20小時(shí)，獲得具有凝乳酶活性的發(fā)酵液。

本發(fā)明所述的種子液可以是常規(guī)的，較佳的，由包括以下步驟的方法制備而得：將類(lèi)芽孢桿菌CGMCC No.8333接種于TYC培養(yǎng)基，28～32℃活化培養(yǎng)18～20小時(shí)后，即得種子液。

本發(fā)明所述的接種可以是常規(guī)的，較佳的使用單菌落。

本發(fā)明所述的種子液的接種量可以為常規(guī)的接種量，較佳的為4～6％，更佳的為5％，所述百分比為體積百分比。

本發(fā)明所述的麩皮培養(yǎng)基可以為常規(guī)的麩皮培養(yǎng)基，較佳的包括麩皮和水，所述麩皮含量為1％～14％，較佳的為2％～6％，最佳的為3％，所述百分比為質(zhì)量百分比。

本發(fā)明所述的麩皮可以為常規(guī)的麩皮，較佳的，所述麩皮為小麥麩皮。

本發(fā)明所述的一種類(lèi)芽孢桿菌(Paenibacillus damxungensis sp.nov.)CGMCC No.8333在麩皮培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)凝乳酶的方法，所述的種子液由包括以下步驟的方法制備而得：將類(lèi)芽孢桿菌CGMCC No.8333接種于TYC培養(yǎng)基，28～32℃活化培養(yǎng)18～20小時(shí)后，即得種子液；所述的種子液的接種量為4～6％，所述百分比為體積百分比；所述的麩皮培養(yǎng)基包括麩皮和水，其中麩皮含量為1％～14％，所述百分比為質(zhì)量百分比。

本發(fā)明所述的TYC培養(yǎng)基為常規(guī)的TYC培養(yǎng)基，較佳的由以下組分組成：酪蛋白胨或胰蛋白胨15g/L，蔗糖50g/L，酵母膏5.0g/L，L-胱氨酸0.2g/L，乙酸鈉20g/L，Na₂SO₄0.1g/L，NaCl1g/L，Na₂HPO₄·12H₂O2g/L，NaHCO₃2g/L，瓊脂15～20g/L，余量為水。

本發(fā)明所述的發(fā)酵的方法為常規(guī)，較佳的，在需氧條件下進(jìn)行。