[發明專利]復方女貞子對豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構建方法

在審

• 申請號: 201410322558.1
• 申請日: 2014-07-08
• 公開（公告）號: CN104095934A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發明（設計）人: 朱麗娜;陳仕貴;雷凌華;陳揚;張子燁
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: A61K36/638
• 分類號: A61K36/638;A61K49/00;A61P31/04;A61P37/04
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明屬于藥理實驗領域，尤其涉及一種復方女貞子對豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構建方法。

背景技術

中國是世界上最重要的生豬養殖和豬肉消費大國，擁有悠久的養豬傳統。多殺性巴氏桿菌病是豬場常見病之一，目前主要使用疫苗預防該病，但是該菌分布廣泛，血清型多，致使疫苗預防效果不佳。現代中藥藥理學研究表明，“滋補”類中藥具有一定的免疫增強作用，本發明根據中藥配伍原則和組方理論，將性能相關的中藥配合應用，篩選和優化經驗配方得到女貞子、淫羊藿、白術、茯苓四味中藥組成“復方女貞子”作為免疫增強劑飼喂小白鼠，考察其對豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠的保護作用及其機理。

發明內容

本發明的目的在于提供一種復方女貞子對豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構建方法，旨在考察復方女貞子對豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠的保護作用及其機理。

本發明是這樣實現的，一種復方女貞子對豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構建方法包括：

步驟一、用女貞子、淫羊藿、白術、茯苓制備復方女貞子，女貞子、淫羊藿、白術、茯苓的質量比為2∶1.5∶1∶1；以藥材的10倍水量采用水提法提取濃縮制成1∶1的復方女貞子藥液(1mL藥液相當于1g原藥材)，再分別稀釋成1∶20、1∶40和1∶80的復方女貞子藥液，均勻噴霧于全價鼠料的表面，制成含復方女貞子0.05％、0.1％、0.15％(w/w)的鼠料，備用；

步驟二、將實驗小鼠分組及處理，用于豬多殺性巴氏桿菌半數致死量的測定；

步驟三、飼喂結束后，對小鼠進行碳粒廓清試驗；

步驟四、對小鼠進行溶菌酶活性的測定；

步驟五、進行豬多殺性巴氏桿菌對小鼠半數致死量的測定；

步驟六、對感染豬多殺性巴氏桿菌小鼠保護作用；

步驟七、數據分析。

進一步，所述的制備復方女貞子的具體方法為：

以藥材的10倍水量采用水提法提取濃縮制成1∶1的復方女貞子藥液(1mL藥液相當于1g原藥材)，再分別稀釋成1∶20、1∶40和1∶80的復方女貞子藥液，均勻噴霧于全價鼠料的表面，制成含復方女貞子0.05％、0.1％、0.15％(w/w)的鼠料，備用。

進一步，將實驗小鼠分組及處理的具體方法為：

80只3周齡和60只8周齡SPF級白雄鼠，飼喂滅菌飼料和飲水，室內溫度為28℃，相對濕度為(50±10)％，動物飼養適應3天后進行試驗，將80只3周齡小鼠隨機分成4組，每組20只，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組為實驗組，分別飼喂含復含方女貞子0.05％、0.1％、0.15％(w/w)的鼠料，Ⅳ組為對照組，飼喂普通鼠料，連續飼喂30d，60只7周齡小鼠用于豬多殺性巴氏桿菌半數致死量的測定。

進一步，碳粒廓清試驗的具體方法為：

飼喂結束后，每組隨機取10只小鼠，稱重，每只小鼠使用胰島素注射器由尾靜脈注入0.1mL/10g的印度墨汁(生理鹽水稀釋6倍)，注射后分別在2min(T1)、7min(T2)乙醚麻醉后用玻璃毛細管從小鼠眼眶靜脈叢采血20μL，溶于20mL0.1％Na₂CO₃溶液中搖勻，靜置20min后每個樣品取100μL加入到96孔板中，取兩次樣分別加入不同孔中，以0.1％溶液為空白對照，使用酶標儀在680nm波長測量其OD值，將小鼠處死后取肝臟和脾臟，用濾紙吸干血跡后稱重，根據公式計算廓清指數K值、校正廓清指數Ka值及免疫器官指數，計算公式為