[發明專利]復方女貞子對豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構建方法

在審

• 申請號: 201410322558.1
• 申請日: 2014-07-08
• 公開（公告）號: CN104095934A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發明（設計）人: 朱麗娜;陳仕貴;雷凌華;陳揚;張子燁
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: A61K36/638
• 分類號: A61K36/638;A61K49/00;A61P31/04;A61P37/04
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種復方女貞子對豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構建方法，其特征在于，所述的復方女貞子對豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構建方法包括：

步驟一、用女貞子、淫羊藿、白術、茯苓制備復方女貞子，女貞子、淫羊藿、白術、茯苓的質量比為2∶1.5∶1∶1；以藥材的10倍水量采用水提法提取濃縮制成1∶1的復方女貞子藥液，再分別稀釋成1∶20、1∶40和1∶80的復方女貞子藥液，均勻噴霧于全價鼠料的表面，制成含復方女貞子0.05％、0.1％、0.15％(w/w)的鼠料，備用；

步驟二、將實驗小鼠分組及處理，用于豬多殺性巴氏桿菌半數致死量的測定；

步驟三、飼喂結束后，對小鼠進行碳粒廓清試驗；

步驟四、對小鼠進行溶菌酶活性的測定；

步驟五、進行豬多殺性巴氏桿菌對小鼠半數致死量的測定；

步驟六、對感染豬多殺性巴氏桿菌小鼠保護作用；

步驟七、數據分析。

2.如權利要求1所述的復方女貞子對豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構建方法，其特征在于，所述的制備復方女貞子的具體方法為：

以藥材的10倍水量采用水提法提取濃縮制成1∶1的復方女貞子藥液，再分別稀釋成1∶20、1∶40和1∶80的復方女貞子藥液，均勻噴霧于全價鼠料的表面，制成含復方女貞子0.05％、0.1％、0.15％(w/w)的鼠料，備用。

3.如權利要求1所述的復方女貞子對豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構建方法，其特征在于，將實驗小鼠分組及處理的具體方法為：

80只3周齡和60只8周齡SPF級白雄鼠，飼喂滅菌飼料和飲水，室內溫度為28℃，相對濕度為(50±10)％，動物飼養適應3天后進行試驗，將80只3周齡小鼠隨機分成4組，每組20只，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組為實驗組，分別飼喂含復含方女貞子0.05％、0.1％、0.15％(w/w)的鼠料，Ⅳ組為對照組，飼喂普通鼠料，連續飼喂30d，60只7周齡小鼠用于豬多殺性巴氏桿菌半數致死量的測定。

4.如權利要求1所述的復方女貞子對豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構建方法，其特征在于，碳粒廓清試驗的具體方法為：

飼喂結束后，每組隨機取10只小鼠，稱重，每只小鼠使用胰島素注射器由尾靜脈注入0.1mL/10g的印度墨汁(生理鹽水稀釋6倍)，注射后分別在2min(T1)、7min(T2)乙醚麻醉后用玻璃毛細管從小鼠眼眶靜脈叢采血20μL，溶于20mL0.1％Na₂CO₃溶液中搖勻，靜置20min后每個樣品取100μL加入到96孔板中，取兩次樣分別加入不同孔中，以0.1％溶液為空白對照，使用酶標儀在680nm波長測量其OD值，將小鼠處死后取肝臟和脾臟，用濾紙吸干血跡后稱重，根據公式計算廓清指數K值、校正廓清指數Ka值及免疫器官指數，計算公式為

K=logA1-logA2t2-t1Ka=K3×MM1+M2]]>

其中，M＝體重，M₁＝肝臟重，M₂＝脾臟重，A為吸光光度值。