[發(fā)明專利]復(fù)方女貞子對(duì)豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構(gòu)建方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410322558.1
• 申請(qǐng)日: 2014-07-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104095934A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱麗娜;陳仕貴;雷凌華;陳揚(yáng);張子燁
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K36/638
• 分類號(hào): A61K36/638;A61K49/00;A61P31/04;A61P37/04
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種復(fù)方女貞子對(duì)豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述的復(fù)方女貞子對(duì)豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構(gòu)建方法包括：

步驟一、用女貞子、淫羊藿、白術(shù)、茯苓制備復(fù)方女貞子，女貞子、淫羊藿、白術(shù)、茯苓的質(zhì)量比為2∶1.5∶1∶1；以藥材的10倍水量采用水提法提取濃縮制成1∶1的復(fù)方女貞子藥液，再分別稀釋成1∶20、1∶40和1∶80的復(fù)方女貞子藥液，均勻噴霧于全價(jià)鼠料的表面，制成含復(fù)方女貞子0.05％、0.1％、0.15％(w/w)的鼠料，備用；

步驟二、將實(shí)驗(yàn)小鼠分組及處理，用于豬多殺性巴氏桿菌半數(shù)致死量的測(cè)定；

步驟三、飼喂結(jié)束后，對(duì)小鼠進(jìn)行碳粒廓清試驗(yàn)；

步驟四、對(duì)小鼠進(jìn)行溶菌酶活性的測(cè)定；

步驟五、進(jìn)行豬多殺性巴氏桿菌對(duì)小鼠半數(shù)致死量的測(cè)定；

步驟六、對(duì)感染豬多殺性巴氏桿菌小鼠保護(hù)作用；

步驟七、數(shù)據(jù)分析。

2.如權(quán)利要求1所述的復(fù)方女貞子對(duì)豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述的制備復(fù)方女貞子的具體方法為：

以藥材的10倍水量采用水提法提取濃縮制成1∶1的復(fù)方女貞子藥液，再分別稀釋成1∶20、1∶40和1∶80的復(fù)方女貞子藥液，均勻噴霧于全價(jià)鼠料的表面，制成含復(fù)方女貞子0.05％、0.1％、0.15％(w/w)的鼠料，備用。

3.如權(quán)利要求1所述的復(fù)方女貞子對(duì)豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，將實(shí)驗(yàn)小鼠分組及處理的具體方法為：

80只3周齡和60只8周齡SPF級(jí)白雄鼠，飼喂滅菌飼料和飲水，室內(nèi)溫度為28℃，相對(duì)濕度為(50±10)％，動(dòng)物飼養(yǎng)適應(yīng)3天后進(jìn)行試驗(yàn)，將80只3周齡小鼠隨機(jī)分成4組，每組20只，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組為實(shí)驗(yàn)組，分別飼喂含復(fù)含方女貞子0.05％、0.1％、0.15％(w/w)的鼠料，Ⅳ組為對(duì)照組，飼喂普通鼠料，連續(xù)飼喂30d，60只7周齡小鼠用于豬多殺性巴氏桿菌半數(shù)致死量的測(cè)定。

4.如權(quán)利要求1所述的復(fù)方女貞子對(duì)豬多殺性巴氏桿菌感染小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，碳粒廓清試驗(yàn)的具體方法為：

飼喂結(jié)束后，每組隨機(jī)取10只小鼠，稱重，每只小鼠使用胰島素注射器由尾靜脈注入0.1mL/10g的印度墨汁(生理鹽水稀釋6倍)，注射后分別在2min(T1)、7min(T2)乙醚麻醉后用玻璃毛細(xì)管從小鼠眼眶靜脈叢采血20μL，溶于20mL0.1％Na₂CO₃溶液中搖勻，靜置20min后每個(gè)樣品取100μL加入到96孔板中，取兩次樣分別加入不同孔中，以0.1％溶液為空白對(duì)照，使用酶標(biāo)儀在680nm波長(zhǎng)測(cè)量其OD值，將小鼠處死后取肝臟和脾臟，用濾紙吸干血跡后稱重，根據(jù)公式計(jì)算廓清指數(shù)K值、校正廓清指數(shù)Ka值及免疫器官指數(shù)，計(jì)算公式為

K=logA1-logA2t2-t1Ka=K3×MM1+M2]]>

其中，M＝體重，M₁＝肝臟重，M₂＝脾臟重，A為吸光光度值。