[發(fā)明專利]一種鑒定籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗病性的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410322481.8
• 申請日: 2014-07-04
• 公開（公告）號: CN104025928A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發(fā)明（設計）人: 魏林;梁志懷;張屹;陳玉榮;文吉輝;馬艷青;呂剛;成燕清;肖密;胡雅輝
• 申請（專利權）人: 湖南省植物保護研究所
• 主分類號: A01G7/06
• 分類號: A01G7/06;C12Q1/18;C12R1/77
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所 43114
• 代理人: 袁靖

技術領域

本發(fā)明屬于水生蔬菜的植物保護技術領域；具體涉及鑒定籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗病性的方法。

背景技術

籽蓮屬睡蓮科植物，是“中國蓮”三大品系(藕蓮、籽蓮、花蓮)栽培品種之一，因其具有觀賞價值高的蓮花、味美可口的鮮食嫰籽、可加工成各種營養(yǎng)豐富食品的老熟蓮子，在我國具有十分悠久的種植歷史。近年來，隨著種植業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整，我國的籽蓮種植面積有了較大幅度增加，已成為蓮農(nóng)創(chuàng)收的重要途徑。

籽蓮從浮葉生出到蓮蓬采收的整個生育期，都會受到腐敗病的為害，該病可使籽蓮地下莖腐爛壞死地上部枯萎，一般造成籽蓮減產(chǎn)20％-45％，嚴重時達60％以上，甚至絕收，嚴重影響了蓮子的品質(zhì)和產(chǎn)量。蓮腐敗病主要是由鐮刀菌屬真菌侵染引起的一種土傳病害，由于該病首先為害籽蓮的地下莖(藕節(jié))，地下部受到病原菌的侵染出現(xiàn)病變后，病莖生出的地上部葉片和葉柄才逐漸顯癥。蓮鐮刀菌腐敗病發(fā)生的種植環(huán)境特殊性及地上部顯癥明顯的滯后性，以及荷葉特殊的納米結(jié)構(gòu)使得藥液難附著性，都增加了該病的防治難度，使得常規(guī)的防治措施很難取得較好的防控效果。因此，篩選、選育和種植抗病品種是防治該病經(jīng)濟有效的方法之一，其中建立便利高效的籽蓮抗腐敗病的鑒定評價體系和方法，是開展該項工作的基礎。而目前，國內(nèi)尚未見鑒定籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗病性方法的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對目前蓮腐敗病為害日益嚴重而常規(guī)防治方法難以取得理想防治效果的現(xiàn)狀，提供一種籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗性鑒定的體系和方法，以獲得籽蓮抗腐敗病的種質(zhì)資源和育種材料，實現(xiàn)篩選、選育和利用籽蓮抗病品種防治腐敗病的目的。

本發(fā)明的目的是通過以下方式實現(xiàn)的：

一種鑒定籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗病性的方法：1)選擇待鑒定籽蓮品種的顆粒飽滿、充分成熟的當年蓮子，將蓮子種臍一端的果皮破一小口；再將破口的蓮子進行催芽；2)待蓮子萌發(fā)長出帶根的實生苗接種蓮腐敗病病原菌；3)將接種后的實生苗移栽栽培，按照病害評價等級對葉片進行病害等級鑒定，據(jù)此確定植株品種的抗病能力。

所述的蓮真菌性腐敗病病原菌為尖孢鐮刀菌蓮專化型((Fusarium.oxysporum?Schl.sp.nelumbicola(Nis.et?Wat.)Booth))，是從籽蓮發(fā)病植株上分離純化，經(jīng)過分子鑒定，并接種于新鮮藕塊上篩選出的強致病性菌株。

接種新鮮藕塊篩選出強致病性菌株的過程為：經(jīng)過分離純化和分子鑒定的供試鐮刀菌用PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)5d后，用直徑為7mm的無菌打孔器自菌落的邊緣打取菌餅，置于藕塊(取嫩藕節(jié)，中間段的6-8cm，縱剖獲得)的中央，菌絲體面朝下，每個藕塊上均勻接種兩個鐮刀菌菌餅，然后將裝有已接種藕塊的發(fā)芽盒放置于26℃恒溫培養(yǎng)箱中進行保濕培養(yǎng)；依據(jù)發(fā)病藕塊的病情程度來判斷選取強致病性菌株作為籽蓮品種抗病菌鑒定的接種菌株。

接種新鮮藕塊后依據(jù)發(fā)病藕塊的病情程度來判斷菌株的致病力強弱，病情分級標準為：0級：藕塊生長正常、完好；1級：藕塊有輕微病變，病變尚未侵及藕塊體內(nèi)組織；2級：藕塊組織有明顯病變，維管束呈褐色；3級：藕塊維管束呈深褐色，病變部分占藕塊總面積的10％以下；4級：病變部分占藕塊總面積的10％～30％；5級：病變部分占藕塊總面積的30％以上。每個藕塊為一計量單位，每個病原菌接種18個藕塊。病情指數(shù)＝∑(各級藕塊數(shù)×相對級數(shù)值)/(調(diào)查總藕塊數(shù)×5)×100；其致病力強弱的劃分標準：當病情指數(shù)>70時，表示強致病力；當30≤病情指數(shù)≤70時，表示中致病力；當病情指數(shù)<30時，表示弱致病力；病情指數(shù)為0時，表示無致病力。

上述方法中待蓮子萌發(fā)長出直立的幼葉、生根3-5條時，接種蓮腐敗病病原菌。

上述方法中將破口的蓮子浸在滅菌水中，25℃條件下催芽，每天換水一次。

上述方法中蓮腐敗病病原菌在超凈工作臺上按以下操作進行接種：將每條根在距根尖0.5cm處剪斷，以造成根系的微傷口，然后將整個根系浸入由無菌水調(diào)節(jié)的含10⁵-10⁶個孢子/mL蓮腐敗病菌懸浮液中20-40min。

上述方法中將接種后的實生苗移栽于盆缽中栽培，接種至少20d后，按照病害評價等級標準對葉片進行病害等級鑒定，鑒定后計算病情指數(shù)，病情指數(shù)＝∑(各級病葉數(shù)×相對級數(shù)值)/(調(diào)查總?cè)~片數(shù)×6)×100，依據(jù)病情指數(shù)，確定籽蓮品種對腐敗病的抗病性類型。