[發(fā)明專利]一種鑒定籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗病性的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410322481.8
• 申請日: 2014-07-04
• 公開（公告）號: CN104025928A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發(fā)明（設計）人: 魏林;梁志懷;張屹;陳玉榮;文吉輝;馬艷青;呂剛;成燕清;肖密;胡雅輝
• 申請（專利權）人: 湖南省植物保護研究所
• 主分類號: A01G7/06
• 分類號: A01G7/06;C12Q1/18;C12R1/77
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所 43114
• 代理人: 袁靖

1.一種鑒定籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗病性的方法，其特征在于，包括以下步驟：1)選擇待鑒定籽蓮品種的顆粒飽滿、充分成熟的當年蓮子，將含蓮子種臍一端的種殼破一小口；再將破口的蓮子進行催芽；2)待蓮子萌發(fā)長出帶根的實生苗時接種蓮腐敗病病原菌；3)將接種后的實生苗移栽栽培，按照病害評價等級對葉片進行病害等級鑒定，據(jù)此確定植株品種的抗病能力。

2.根據(jù)權利要求1所述的鑒定籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗病性的方法，其特征在于：所述的蓮真菌性腐敗病病原菌為尖孢鐮刀菌蓮?；停菑淖焉彴l(fā)病植株上分離純化，經(jīng)過分子鑒定，并接種于新鮮藕塊上篩選出的強致病性菌株。

3.根據(jù)權利要求1所述的鑒定籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗病性的方法，其特征在于：接種新鮮藕塊篩選出強致病性菌株的過程為：經(jīng)過分離純化和分子鑒定的供試鐮刀菌菌株用PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)5-6d，取嫩藕節(jié)6-8cm長的中間段，縱剖切取獲得用于接種的藕塊；用直徑為5-7mm無菌打孔器自菌落的邊緣打取菌餅，菌餅置于藕塊的中央，菌絲體面朝下，每個藕塊均勻接種兩個鐮刀菌菌餅，然后將裝有接種藕塊的發(fā)芽盒放置于24-26℃恒溫培養(yǎng)箱中進行保濕培養(yǎng)；依據(jù)發(fā)病藕塊的病情程度來判斷、選取強致病性菌株作為籽蓮品種抗病菌鑒定的接種菌株。

4.根據(jù)權利要求3所述的鑒定籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗病性的方法，其特征在于：接種新鮮藕塊依據(jù)發(fā)病藕塊的病情程度來判斷菌株的致病力強弱，病情分級標準為：0級：藕塊生長正常、完好；1級：藕塊表面有輕微病變，病變尚未侵及藕塊體內組織；2級：藕塊組織有明顯病變，維管束呈褐色；3級：藕塊維管束呈深褐色，病變部分占藕塊總面積的10％以下；4級：藕塊維管束呈深褐色，病變部分占藕塊總面積的10％～30％；5級：藕塊維管束呈深褐色，病變部分占藕塊總面積的30％以上，每個藕塊為一計量單位。病情指數(shù)＝∑(各級藕塊數(shù)×相對級數(shù)值)/(調查總藕塊數(shù)×5)×100；腐敗病病原菌致病力強弱的劃分標準：病情指數(shù)>70，表示強致病力；30≤病情指數(shù)≤70，表示中致病力；病情指數(shù)<30，表示弱致病力；病情指數(shù)為0，表示無致病力。

5.根據(jù)權利要求1所述的鑒定籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗病性的方法，其特征在于：待蓮子萌發(fā)長出直立的幼葉、生根3-5條時，接種蓮腐敗病病原菌。

6.根據(jù)權利要求1或5所述的鑒定籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗病性的方法，其特征在于：將破口的蓮子在滅菌水中，24-26℃條件下催芽，每天換水一次。

7.根據(jù)權利要求1或5所述的鑒定籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗病性的方法，其特征在于：蓮腐敗病病原菌在超凈工作臺上按以下操作進行接種：將每條根在距根尖0.5cm處剪斷，以造成根系的微傷口，然后將整個根系浸入由無菌水調節(jié)的含10⁵-10⁶個孢子/mL蓮腐敗病病原菌懸浮液中20-40min。

8.根據(jù)權利要求1所述的鑒定籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗病性的方法，其特征在于：將接種后的實生苗移栽于盆缽中栽培，接種至少20d后，按照病害評價等級對葉片進行病害等級鑒定，鑒定后計算病情指數(shù)，病情指數(shù)＝∑(各級病葉數(shù)×相對級數(shù)值)/(調查總葉片數(shù)×6)×100，依據(jù)病情指數(shù)，確定籽蓮品種對腐敗病的抗病性類型。

9.根據(jù)權利要求1或8所述的鑒定籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗病性的方法，其特征在于：病害評價等級分為1-6級，具體是：0級-植株葉片未見任何發(fā)病癥狀；1級-葉片僅葉緣出現(xiàn)零星病斑，病斑面積不超過葉該葉片總面積的5％；2級-病斑沿葉緣連片，并向葉片中心發(fā)展，病斑面積占該葉片總面積的5％-20％；3級-病斑面積占該葉片總面積的20％-40％；4-病斑面積占該葉片總面積的40％-60％；5級-病斑面積占該葉片總面積的60％-80％；6級-病斑面積占該葉片總面積的80％-100％，葉片褐腐死亡。

10.根據(jù)權利要求9所述的鑒定籽蓮品種對鐮刀菌腐敗病抗病性的方法，其特征在于：籽蓮不同品種對腐敗病的抗性評價根據(jù)病情指數(shù)分成6個等級：高抗≤10；10＜抗病≤20：20＜中抗≤40；40＜中感≤60；60＜感病≤80；80＜高感≤100。