[發明專利]用于膜蛋白在線鑒定的膜蛋白富集、純化、酶解一體化裝置及使用方法

有效

• 申請號: 201410320892.3
• 申請日: 2014-07-08
• 公開（公告）號: CN104076111A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發明（設計）人: 張祥民;劉一穎;晏國全;高明霞
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 陸飛;盛志范

1.?用于膜蛋白線鑒定的膜蛋白富集、純化、酶解一體化裝置，其特征在于由一個四元高壓泵、一個進樣針、一個進樣環、一個六通閥、一個膜蛋白共價固定的反應柱、一個十通閥和一個捕集柱組成；其中，六通閥具有6個接口，四元高壓泵與六通閥的2號口相連，六通閥的5號口為進樣口，進樣環連接于六通閥的1號口和4號口之間，反應柱連接于六通閥的3號口與十通閥的1號口之間，捕集柱連接于十通閥的2號口與6號口之間，六通閥的5號口與十通閥的5號口連接廢液瓶；所述四元高壓泵具有A、B、C、D共4個相位，分別對應于A、B、C、D?4個相，A相為反應緩沖液，B相為Tris-HCl?和?0NaCl?的混合溶液，C相為NH₄CO₃溶液，D?相為去離子水。

2.?根據權利要求1所述的用于膜蛋白線鑒定的膜蛋白富集、純化、酶解一體化裝置，其特征在于所述膜蛋白共價固定的反應柱所用的填料為表面修飾有三氟乙磺酸基、環氧基或醛基等活性基團的球形材料，這些基團與膜蛋白表面的游離氨基可發生親核取代反應，從而高效地固定膜蛋白。

3.?一種如權利要求1或2所述的用于膜蛋白線鑒定的膜蛋白富集、純化、酶解一體化裝置的使用方法，其特征在于具體步驟為：

第一步：將六通閥和十通閥均保持在A位，用進樣針將膜蛋白樣品注射入進樣環，并利用高壓泵將A相緩沖液沖洗反應柱；

第二步：將六通閥切換至B位，用A相將進樣環中的樣品以0.1-0.4?μL/min的流速通過反應柱；

第三步，將六通閥切換至A位，先后用B相和C相沖洗反應柱，并在進樣環中注射Trypsin溶液；

第四步，將六通閥切和十通閥均換至B位，用C相將酶溶液以0.1-0.4μL/min的流速通過反應柱，然后用D相沖洗反應柱以及捕集柱；

第五步：將十通閥切換至C位，利用液質聯用系統對捕集柱內的肽段進行分析。