[發明專利]一種來源于雞腸道的雌馬酚產生梭菌C1-6及應用

有效

• 申請號: 201410320599.7
• 申請日: 2014-07-04
• 公開（公告）號: CN104087532A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 尹業師;方丹;王欣
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P17/06;A23K1/16;A23K1/18;C12R1/145
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.來源于雞腸道的雌馬酚產生梭菌(Clostridium?sp.)C1-6，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.9123，保藏日期2014年5月4日，保藏單位地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所。

2.一種權利要求1所述雌馬酚產生梭菌C1-6在催化大豆素制備S-雌馬酚中的應用，其特征在于所述的應用為：將雌馬酚產生梭菌C1-6經擴大培養獲得的種子液以體積濃度5％的接種量接種至含大豆素的BHI培養基，在厭氧條件下，37℃培養48h后，取培養液分離純化，獲得S-雌馬酚；所述BHI培養基終濃度組成為：蛋白胨10g/L、脫水小牛腦浸粉12.5g/L、脫水牛心浸粉5.0g/L、氯化鈉5.0g/L、葡萄糖2.0g/L、磷酸氫二鈉2.5g/L，溶劑為水，pH值為7.0。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于所述大豆素的初始濃度為50μg/ml。

4.如權利要求2所述的應用，其特征在于所述反應液分離純化的方法為：取1ml的培養液，8000r/min離心3分鐘，獲得上清a；取900μl上清a至另一干凈的2ml?EP管中，然后向管中加入900μl乙酸乙酯，充分混勻后靜置5min，5000r/min離心5分鐘，獲得上清b和沉淀b；取900μl上清b至另一干凈的2ml?EP管中；取沉淀b加入等量的乙酸乙酯重復離心1次，獲得上清c；將上清b和上清c混合在一起，移到2ml離心管中，45℃真空冷凍濃縮成粉末；加入200μl無水甲醇到該EP管溶解濃縮粉末，并經0.22μm聚偏氟乙稀微孔濾膜過濾，濾液即為S-雌馬酚。

5.如權利要求2所述的應用，其特征在于所述種子液按如下步驟制備：將雌馬酚產生梭菌C1-6接種至梭菌液體培養基，37℃培養過夜，取培養液在8000轉/分離心3分鐘后，棄上清，沉淀用質量濃度20％的甘油水溶液制成菌懸液，將菌懸液在-80℃保存；將-80℃保存的菌懸液以體積濃度2％的接種量接種到梭菌液體培養基中，37℃、厭氧靜置培養48h后，獲得種子液；所述梭菌液體培養基終濃度組成為：牛肉浸膏10g/L、蛋白胨10g/L、葡萄糖5g/L、氯化鈉5g/L、酵母提取物3g/L、醋酸鈉3g/L、可溶性淀粉1g/L、L-半胱氨酸鹽酸鹽0.5g/L、瓊脂0.5g/L，以蒸餾水為溶劑，pH值6.8±0.2。