[發明專利]一種PMMoV貴州分離物ID-ELISA檢測試劑盒及其制備方法與應用無效
| 申請號： | 201410319878.1 | 申請日： | 2014-07-07 |
| 公開（公告）號： | CN104101705A | 公開（公告）日： | 2014-10-15 |
| 發明（設計）人： | 乙引;洪鯤;萬晴姣;張宇斌 | 申請（專利權）人： | 貴州師范大學 |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569;G01N33/531 |
| 代理公司： | 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 550001 貴州*** | 國省代碼： | 貴州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 pmmov 貴州 分離 id elisa 檢測 試劑盒 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種PMMoV貴州分離物ID-ELISA檢測試劑盒，其特征在于，包括：陽性對照、陰性對照、PMMoV特異性抗血清、酶標二抗、顯色底物、封閉液、包被緩沖液、PBST洗滌緩沖液、抗體稀釋緩沖液、底物緩沖液以及96孔酶標板；其中，PMMoV特異性抗血清的制備包括以下具體步驟：
(1)根據GenBank中公布的PMMoV各地分離物的CP序列設計一對RT-PCR引物：
正向引物：5'-CTACCCATGGCATACACAGTTACCAGTG，
反向引物：5'-GGAATTCAGGAGTTGTAGCCCACGTAA；
(2)以感染PMMoV貴州辣椒分離物的組織總RNA作為模板，進行RT-PCR擴增、純化以及回收，，得到CP基因片段；
(3)將所述CP基因片段和原核表達載體pET32a(+)以Nco?I和EcoR?I兩種DNA限制性內切酶進行雙酶切處理、片段回收、連接、重組質粒轉化大腸桿菌、重組CP蛋白表達以及重組CP蛋白回收；
(4)將所述重組CP蛋白作為抗原免疫家兔制備特異性PMMoV抗血清，免疫后取兔血，即得到PMMoV特異性抗血清。
2.如權利要求1所述的PMMoV貴州分離物ID-ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述陽性對照為含PMMoV病毒的辣椒葉片冷凍干燥后研磨成的細粉；所述陰性對照為健康無毒辣椒葉片冷凍干燥后研磨成的細粉；所述酶標二抗為堿性磷酸酶標記的羊抗兔抗體溶液。
3.權利要求2所述的PMMoV貴州分離物ID-ELISA檢測試劑盒在辣椒PMMoV的檢測方面的應用。
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