[發明專利]一種評價轉基因棉花對大草蛉影響的生物測定方法

有效

• 申請號: 201410318625.2
• 申請日: 2014-07-04
• 公開（公告）號: CN104133054A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發明（設計）人: 王英麗;梁革梅;魏紀珍;袁向東;趙曼
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: G01N33/48
• 分類號: G01N33/48
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種評價轉基因棉花對大草蛉影響的生物測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)在培養皿底部鋪入濃度為2％的瓊脂；

2)將轉基因棉花葉片放入瓊脂表面，接入初孵棉鈴蟲幼蟲，使其取食轉基因棉花葉片1-3天；

3)大草蛉初孵幼蟲先用豌豆蚜飼喂1-3天，之后用取食轉基因棉花葉片1-3天的棉鈴蟲幼蟲飼喂大草蛉幼蟲，每天更換新鮮棉鈴蟲幼蟲；

4)從飼喂棉鈴蟲幼蟲第1天起每天觀察大草蛉幼蟲生長發育情況，直至化蛹、羽化；

5)以取食常規非轉基因棉花葉片的棉鈴蟲幼蟲飼喂大草蛉幼蟲作為對照組；

6)以大草蛉的化蛹率、羽化率、最后一次取食棉鈴蟲后的幼蟲重量、羽化后24小時的成蟲重量、總發育時間作為指標，比較處理組與對照組的差異，通過方差分析比較其差異顯著性，評價轉基因棉花對大草蛉的影響：如果差異顯著，表明存在影響；反之，不存在影響。

2.根據權利要求1所述的生物測定方法，其特征在于，步驟5)中，如果與取食豌豆蚜的大草蛉幼蟲相比，對照組中大草蛉幼蟲生長緩慢，需同時給處理組和對照組的大草蛉幼蟲補充營養，使大草蛉幼蟲順利完成生活史。

3.根據權利要求2所述的生物測定方法，其特征在于，通過飼喂豌豆蚜和/或鱗翅目害蟲卵補充營養。

4.根據權利要求3所述的生物測定方法，其特征在于，采用隔天補充營養：一天棉鈴蟲幼蟲、一天豌豆蚜和/或鱗翅目害蟲卵。

5.根據權利要求1-4任一所述的生物測定方法，其特征在于，所述步驟2)中轉基因棉花葉片為苗期5葉期的葉片。

6.根據權利要求5所述的生物測定方法，其特征在于，葉片反面貼放在瓊脂表面。

7.根據權利要求1-4任一所述的生物測定方法，其特征在于，所述初孵棉鈴蟲用Bt篩選的抗性棉鈴蟲，品系的選擇根據需要測定的轉基因棉花中表達的相應Bt蛋白種類而確定，以敏感棉鈴蟲為對照。

8.根據權利要求1-4任一所述的生物測定方法，其特征在于，所述大草蛉每天飼喂5-10頭棉鈴蟲幼蟲。