[發明專利]一種海洋中石油烴濃度的檢測方法

有效

• 申請號: 201410318328.8
• 申請日: 2014-07-04
• 公開（公告）號: CN104120179A
• 公開（公告）日: 2014-10-29
• 發明（設計）人: 葉文婷;劉博;劉永清;謝路順;鐘得喜
• 申請（專利權）人: 深圳市格瑞斯特環保技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 劉先珍

技術領域

本發明涉及海洋環境有毒物質濃度研究領域，尤其涉及一種對海洋中石油烴濃度的生物檢測方法。

背景技術

石油烴是由碳氫化合物組成的復雜混合體，主要由烴類組成，尤其是輕芳香烴物質及其衍生物。石油烴對海洋生物具有毒性，主要是使生物的營養與輸導產生混亂，高濃度時甚至會導致生物大量死亡，對海洋生態系統可造成極大的破壞。特別是高環芳烴毒性最強，有些組分具有致癌性，能使魚產生油臭味，油粘在魚鰓上或魚卵上，很快會使之窒息死亡，或使孵化受到影響，更主要的危害是，其中含有致癌烴，被魚貝富集以后，會通過食物鏈危害人體健康。近年來海上石油開采和運輸事故頻頻發生，加之海上輪船運輸業的快速發展以及工業、生活污水的大量排放，海洋環境中石油烴污染日益嚴重，甚至已經威脅到海洋生物的生存。

可口革囊星蟲俗稱海丁、海瑪蝗、沙蟲、泥蒜、土筍等，隸屬于星蟲動物門、革囊星蟲綱、革囊星蟲目、革囊星蟲科、革囊星蟲屬

，為我國的特有種，廣泛分布于浙江、福建、廣東、廣西和海南等省區。可口革囊星蟲是海洋漁業資源中具有重要經濟意義的種類，近年來由于沿海環境污染加劇以及人們過度采捕，造成資源嚴重衰退，因此，可口革囊星蟲的資源保護已經開始受到人們的重視。

目前，研究海洋中石油烴濃度的方法有很多，主要有紫外分光光度法、重量法、紅外光度法、熒光分光光度法和氣象色譜法等。紫外分光光度法由于靈敏度低，對飽和烴、環烴無效，比較適于高濃度樣品中石油烴濃度的測定。重量法研究流程長，靈敏度低，只適合測定含油量在10mg/L以上的水樣，而且在提取和溶劑蒸發過程中容易揮發掉，方法的精密度隨操作條件和操作員的熟練程度不同而差別很大。紅外光度法包括非色散紅外吸收光度法和紅外光譜法兩個部分，其中前者的優點是儀器結構簡單，測量具有較好的重現性，缺點是只能研究石油烴中的直鏈烷烴和環烷烴，不能研究苯系物，后者能準確地測量出石油烴的總濃度，但是在測定魚貝中石油烴的濃度時，若魚貝中動物油脂有殘留，則極容易受到干擾。熒光分光光度法研究石油烴濃度的靈敏度非常高，但是它僅能測定石油烴中苯系物的濃度，無法測定石油烴中直鏈烷烴和直鏈烷烴的濃度，而且不同物質的熒光發射強度差異很大，測定結果受樣品中油品組成影響很大。氣相色譜法是將石油烴色譜柱分離后，分別研究不同的石油烴組分，靈敏度高，但是由于石油烴組成十分復雜，不適合石油烴總濃度的測定。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供一種對海洋中石油烴濃度的檢測方法，這種檢測方法適用范圍廣，實驗流程短，安全性好，靈敏度和準確性高。

本發明所采用的技術方案是：

一種海洋中石油烴濃度的檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：

1）將健康的可口革囊星蟲分別與添加有不同已知濃度的石油烴和待測樣品的培養液共培養一定時間；

檢測不同培訓條件下可口革囊星蟲的體腔液細胞DNA損傷狀況，根據已知石油烴的濃度確定DNA損傷狀況與石油烴濃度之間的數值關系；?????2）根據確定的數值關系計算待檢樣品中石油烴的濃度。

優選地，所述數值關系使用繪制標準曲線的方式來確定。???

優選地，所述培養液的配置步驟為：將原油和經過濾滅菌后的天然海水按比例混合，接著超聲分散后靜置，吸取下層水相作為母液，將母液冷凍保存，用石油烴母液加一定量的海水配制等體積的若干個梯度濃度的石油烴溶液，隨后加等量的同一批海泥混勻。

優選地，所述原油和經過濾滅菌后的天然海水的比例為1:10—1:8，所述超聲分散時間為1h—1.5h，靜置時間為4—5h，冷凍溫度為3℃—4℃，所述梯度濃度個數為6—8個。

優選地，所述培養方法為：將體重2~3g的可口革囊星蟲，在裝有濕海泥的塑料桶中養一周待其狀態穩定，取健康的可口革囊星蟲隨機分組，每組20只分別放入所配制的石油烴培養液中培養7d~10d，試驗期間水溫穩定為20℃~25℃，并在實驗的第0、1、2、4、7天，獲取可口革囊星蟲的體腔液細胞。

優選地，所述DNA損傷狀況的檢測方法為單細胞凝膠電泳分析，其包括采用三層鋪膠法制片、細胞裂解、解旋及電泳、中和、染色、鏡檢6個步驟。

優選地，所述口革囊星蟲體腔液細胞細胞DNA的損傷狀況分析采用SPSS軟件統計分析。

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