[發(fā)明專利]一種制備掃描電鏡用寄生蟲樣品的環(huán)氧樹脂包埋方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410316245.5
• 申請日: 2014-07-04
• 公開（公告）號: CN104075922A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發(fā)明（設計）人: 聶志娟;賀子義;胡冰;顧若波;徐鋼春;杜富寬
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院淡水漁業(yè)研究中心
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01Q30/20
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌;曹翠珍

1.一種制備掃描電鏡用寄生蟲樣品的環(huán)氧樹脂包埋方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一，樣品前期處理：將寄生蟲活體迅速殺死后包裹于定性濾紙中；?

步驟二，樣品固定：將樣品置于戊二醛中固定2～4小時，然后使用PBS緩沖液將樣品表面清洗干凈，除去戊二醛，再用鋨酸固定，將寄生蟲熏成黑色；

步驟三，樣品清洗和梯度脫水：使用PBS緩沖液將樣品表面清洗干凈，除去鋨酸，然后用體積濃度為30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％、100％、100％的丙酮作梯度脫水；

步驟四，置換：寄生蟲脫水后采用環(huán)氧樹脂包埋劑與丙酮的混合液中浸漬包埋；

步驟五，清洗：將環(huán)氧樹脂包埋劑浸漬后的寄生蟲挑出放到網眼小于寄生蟲體的篩網上，在70℃條件下聚合3～5小時，自然冷卻至室溫后用丙酮清洗，直到線蟲表面變?yōu)闊o光澤為止，再在70℃條件下聚合12～24小時；

步驟六，樣品鍍膜：將聚合好的樣品臺用離子濺射儀噴金90?~?120s，在寄生蟲樣品表面均勻鍍上一層導電的金膜，即完成寄生蟲掃描電鏡樣品的制備。

2.根據權利要求1所述的制備掃描電鏡用寄生蟲樣品的環(huán)氧樹脂包埋方法，其特征在于，步驟一中活體寄生蟲在試管中于60℃、?3~5分鐘條件下迅速殺死。

3.根據權利要求1所述的制備掃描電鏡用寄生蟲樣品的環(huán)氧樹脂包埋方法，其特征在于，步驟二中戊二醛的質量濃度為2％。

4.根據權利要求1所述的制備掃描電鏡用寄生蟲樣品的環(huán)氧樹脂包埋方法，其特征在于，步驟二中鋨酸的質量濃度為1％。

5.根據權利要求1所述的制備掃描電鏡用寄生蟲樣品的環(huán)氧樹脂包埋方法，其特征在于，步驟四中置換包埋為將寄生蟲充分脫水后轉入體積比為1:3的環(huán)氧樹脂包埋劑與丙酮的混合液中浸漬2小時，然后轉入體積比為1:1的環(huán)氧樹脂包埋劑與丙酮的混合液中浸漬4小時，再轉入體積比為3:1的環(huán)氧樹脂包埋劑與丙酮的混合液中浸漬6小時，最后轉入純環(huán)氧樹脂包埋劑中浸漬8~12小時。

6.根據權利要求1所述的制備掃描電鏡用寄生蟲樣品的環(huán)氧樹脂包埋方法，其特征在于，所述的寄生蟲是：樣品相對較小，形態(tài)易變，體內無脊椎骨骼支撐的扁形動物門或者原生動物門。