[發明專利]一種茄子花藥培養誘導單倍體植株的培養基及其方法

有效

• 申請號: 201410313632.3
• 申請日: 2014-07-03
• 公開（公告）號: CN104542274A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 李建欣;田朝輝;葛桂民;龐淑敏;申愛民;趙香梅
• 申請（專利權）人: 鄭州市蔬菜研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 鄭州中原專利事務所有限公司 41109
• 代理人: 張春;王曉麗

1.一種茄子花藥培養誘導單倍體植株的培養基，其特征在于：所述培養基包括茄子花藥培養愈傷組織誘導培養基和愈傷組織分化培養基，所述茄子花藥培養愈傷組織誘導培養基為：MS基本培養基，0.2-0.5mg/L?2,4-D，0.5-1mg/L?KT，5-10mg/L?Vc，3%蔗糖，5g/L瓊脂，PH值5.8；所述愈傷組織分化培養基為：MS基本培養基，0.01-0.05mg/L?IAA，1.0-2.0mg/L?6-BA，0.1-0.5g/L活性炭，2%蔗糖，5.5g/L瓊脂，PH值5.8。

2.根據權利要求1所述的一種茄子花藥培養單倍體植株的培養基，其特征在于：所述茄子花藥培養愈傷組織誘導培養基為：MS基本培養基，0.2mg/L?2,4-D，0.9mg/L?KT，10mg/L?Vc，3%蔗糖，5g/L瓊脂，PH值5.8；所述愈傷組織分化培養基為：MS基本培養基，0.02mg/L?IAA，2.0mg/L?6-BA，0.5g/L活性炭，2%蔗糖，5.5g/L瓊脂，PH值5.8。

3.根據權利要求1所述的一種茄子花藥培養誘導單倍體植株的方法，其特征在于：所述花藥的培養包括如下步驟：

1)?從茄子植株上生長對茄或四門斗茄的位置上選取花蕾，花蕾中花藥細胞處于單核中期至單核靠邊期，花蕾直徑7-10mm，花藥為黃綠色偏綠；

2)?預處理：將采集回來的花蕾用防水袋或培養瓶封閉，置于4-5℃冷藏室保存12-24h；

3)?滅菌：用70%或者75%的酒精進行花蕾表面消毒30s；再用次氯酸鈉原液的體積濃度為7％的溶液浸泡15-20min，其中次氯酸鈉原液中次氯酸鈉的質量濃度為10%；用無菌水洗滌3-4次，每次3min，然后用無菌紙吸干花蕾備用；

4)?接種：在無菌工作臺上從滅完菌的花蕾中輕輕剝取花藥，接種于裝有茄子花藥培養愈傷組織的誘導培養基的Φ60mm的培養皿中，每個培養皿裝有10mL培養基，每個培養皿接1-2個花蕾的花藥；

5)?熱激處理：將接種好花藥的培養皿放到培養箱內進行熱激處理，黑暗培養，熱激溫度為35~40℃，處理4~9d；

6)?花藥培養：經高溫熱激處理后的花藥，放置在25-28℃，光照強度1500-2000Lx、光照12-16h/d下培養，視培養基情況，每隔15-20d轉接培養基一次，30~40d會出現愈傷組織；

7)?愈傷組織再生植株：當花藥中部或頂部愈傷組織塊長到直徑約7~10mm，將愈傷組織轉化到愈傷組織分化培養基上，每間隔15-20?d切割繼代一次，30-45?d愈傷組織上開始分化出綠色芽點，繼代培養條件：光照強度1500-2000Lx、光照12-16h/d，溫度為25-28℃，經過繼代培養，45%-55%的愈傷組織分化為成熟的胚狀體直接生成根莖葉具全的完整小植株；

8)?再生植株誘導生根：8%-12%的愈傷組織直接分化出無根的再生芽，當芽苗長到3cm時，切下帶部分愈傷組織的小苗，轉接到MS培養基中，在光照強度1500-2000Lx、光照12-16h/d，溫度為25-28℃生根培養條件下，10-15d后長出不定根，生成完整植株，生根率為90%；

9)?倍性檢測：采用根尖生長點染色體倍數檢測方法，在無菌工作臺中從培養瓶中剪取生根再生苗的幼嫩根尖進行檢測；?

10)?單倍體植株加倍：將步驟9檢測所得單倍體植株采用生長點浸泡法加倍，移栽后在傍晚剝去單倍體植株的生長點外部幼葉，使生長錐外漏，用脫脂棉蘸取0.3-1.0%秋水仙堿+1.5%DMSO溶液，包裹生長錐，外邊再用黑色塑料膜包裹，處理1~3h，可得二倍體正常茄子雌雄花，加倍率達60%。

4.根據權利要求3所述的一種茄子花藥培養誘導單倍體植株的方法，其特征在于：所述步驟（5）中，將接種好花藥的培養皿放到培養箱內進行熱激處理，黑暗培養，熱激溫度為36℃，處理5d。

5.根據權利要求3所述的一種茄子花藥培養誘導單倍體植株的方法，其特征在于：所述步驟（7）中，當花藥中部或頂部愈傷組織塊長到直徑8mm，將愈傷組織轉化到愈傷組織分化培養基上。

6.根據權利要求3所述的一種茄子花藥培養誘導單倍體植株的方法，其特征在于：所述步驟（10）中，用脫脂棉蘸取0.5%秋水仙堿+1.5%DMSO溶液包裹生長錐，外邊再用黑色塑料膜包裹，處理2h。