[發(fā)明專利]一種茄子花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)單倍體植株的培養(yǎng)基及其方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410313632.3
• 申請日: 2014-07-03
• 公開（公告）號: CN104542274A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李建欣;田朝輝;葛桂民;龐淑敏;申愛民;趙香梅
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州市蔬菜研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 鄭州中原專利事務(wù)所有限公司 41109
• 代理人: 張春;王曉麗

1.一種茄子花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)單倍體植株的培養(yǎng)基，其特征在于：所述培養(yǎng)基包括茄子花藥培養(yǎng)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基和愈傷組織分化培養(yǎng)基，所述茄子花藥培養(yǎng)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基，0.2-0.5mg/L?2,4-D，0.5-1mg/L?KT，5-10mg/L?Vc，3%蔗糖，5g/L瓊脂，PH值5.8；所述愈傷組織分化培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基，0.01-0.05mg/L?IAA，1.0-2.0mg/L?6-BA，0.1-0.5g/L活性炭，2%蔗糖，5.5g/L瓊脂，PH值5.8。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種茄子花藥培養(yǎng)單倍體植株的培養(yǎng)基，其特征在于：所述茄子花藥培養(yǎng)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基，0.2mg/L?2,4-D，0.9mg/L?KT，10mg/L?Vc，3%蔗糖，5g/L瓊脂，PH值5.8；所述愈傷組織分化培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基，0.02mg/L?IAA，2.0mg/L?6-BA，0.5g/L活性炭，2%蔗糖，5.5g/L瓊脂，PH值5.8。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種茄子花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)單倍體植株的方法，其特征在于：所述花藥的培養(yǎng)包括如下步驟：

1)?從茄子植株上生長對茄或四門斗茄的位置上選取花蕾，花蕾中花藥細(xì)胞處于單核中期至單核靠邊期，花蕾直徑7-10mm，花藥為黃綠色偏綠；

2)?預(yù)處理：將采集回來的花蕾用防水袋或培養(yǎng)瓶封閉，置于4-5℃冷藏室保存12-24h；

3)?滅菌：用70%或者75%的酒精進(jìn)行花蕾表面消毒30s；再用次氯酸鈉原液的體積濃度為7％的溶液浸泡15-20min，其中次氯酸鈉原液中次氯酸鈉的質(zhì)量濃度為10%；用無菌水洗滌3-4次，每次3min，然后用無菌紙吸干花蕾備用；

4)?接種：在無菌工作臺上從滅完菌的花蕾中輕輕剝?nèi)』ㄋ帲臃N于裝有茄子花藥培養(yǎng)愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的Φ60mm的培養(yǎng)皿中，每個培養(yǎng)皿裝有10mL培養(yǎng)基，每個培養(yǎng)皿接1-2個花蕾的花藥；

5)?熱激處理：將接種好花藥的培養(yǎng)皿放到培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行熱激處理，黑暗培養(yǎng)，熱激溫度為35~40℃，處理4~9d；

6)?花藥培養(yǎng)：經(jīng)高溫?zé)峒ぬ幚砗蟮幕ㄋ帲胖迷?5-28℃，光照強度1500-2000Lx、光照12-16h/d下培養(yǎng)，視培養(yǎng)基情況，每隔15-20d轉(zhuǎn)接培養(yǎng)基一次，30~40d會出現(xiàn)愈傷組織；

7)?愈傷組織再生植株：當(dāng)花藥中部或頂部愈傷組織塊長到直徑約7~10mm，將愈傷組織轉(zhuǎn)化到愈傷組織分化培養(yǎng)基上，每間隔15-20?d切割繼代一次，30-45?d愈傷組織上開始分化出綠色芽點，繼代培養(yǎng)條件：光照強度1500-2000Lx、光照12-16h/d，溫度為25-28℃，經(jīng)過繼代培養(yǎng)，45%-55%的愈傷組織分化為成熟的胚狀體直接生成根莖葉具全的完整小植株；

8)?再生植株誘導(dǎo)生根：8%-12%的愈傷組織直接分化出無根的再生芽，當(dāng)芽苗長到3cm時，切下帶部分愈傷組織的小苗，轉(zhuǎn)接到MS培養(yǎng)基中，在光照強度1500-2000Lx、光照12-16h/d，溫度為25-28℃生根培養(yǎng)條件下，10-15d后長出不定根，生成完整植株，生根率為90%；

9)?倍性檢測：采用根尖生長點染色體倍數(shù)檢測方法，在無菌工作臺中從培養(yǎng)瓶中剪取生根再生苗的幼嫩根尖進(jìn)行檢測；?

10)?單倍體植株加倍：將步驟9檢測所得單倍體植株采用生長點浸泡法加倍，移栽后在傍晚剝?nèi)伪扼w植株的生長點外部幼葉，使生長錐外漏，用脫脂棉蘸取0.3-1.0%秋水仙堿+1.5%DMSO溶液，包裹生長錐，外邊再用黑色塑料膜包裹，處理1~3h，可得二倍體正常茄子雌雄花，加倍率達(dá)60%。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種茄子花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)單倍體植株的方法，其特征在于：所述步驟（5）中，將接種好花藥的培養(yǎng)皿放到培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行熱激處理，黑暗培養(yǎng)，熱激溫度為36℃，處理5d。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種茄子花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)單倍體植株的方法，其特征在于：所述步驟（7）中，當(dāng)花藥中部或頂部愈傷組織塊長到直徑8mm，將愈傷組織轉(zhuǎn)化到愈傷組織分化培養(yǎng)基上。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種茄子花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)單倍體植株的方法，其特征在于：所述步驟（10）中，用脫脂棉蘸取0.5%秋水仙堿+1.5%DMSO溶液包裹生長錐，外邊再用黑色塑料膜包裹，處理2h。