[發明專利]一種茄子花藥培養誘導單倍體植株的培養基及其方法

有效

• 申請號: 201410313632.3
• 申請日: 2014-07-03
• 公開（公告）號: CN104542274A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 李建欣;田朝輝;葛桂民;龐淑敏;申愛民;趙香梅
• 申請（專利權）人: 鄭州市蔬菜研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 鄭州中原專利事務所有限公司 41109
• 代理人: 張春;王曉麗

技術領域

???本發明涉及植物生物技術領域的一種茄子花藥培養誘導單倍體植株的培養基及其方法。

背景技術

????植物花藥培養技術在作物遺傳育種理論和實踐研究中具有廣闊的應用前景，通過花藥培養可快速有效的獲得純合雙單倍體，避免了通過傳統育種手段需要多代自交才可以獲得純合穩定的品系，從而大大縮短了育種周期，提高了選擇效率，降低成本。此外，通過花藥培養獲得的雙單倍體可直接用于遺傳圖譜的構建、培育新品種或作為優良親本用于品種改良。利用花藥培養誘導單倍體或雙單倍體已在很多植物上有成功的報道，同時利用獲得的新種質資源已進行了新品種的選育和推廣，并取得了良好的社會和經濟效益。

????隨著植物花藥培養技術的發展，為茄子新品種的選育開辟了一條新途徑。利用茄子花藥可快速獲得純系和突變體，創新種質資源，對茄子的品種改良具有重要的意義。目前茄子花藥培養在實際育種中的應用的不足有愈傷組織誘導率較低，再生植株分化率低，單倍體植株的加倍率低，培養周期長等。因此，如何提高茄子花藥培養中愈傷組織的誘導率和愈傷組織分化植株的分化率及單倍體植株的加倍率是茄子花藥培養技術研究中急需解決的一個難題。

發明內容

????本發明的目的在于克服現有花藥培養技術中愈傷組織誘導率低的不足，愈傷組織分化植株分化率低的不足及單倍體植株加倍率低的不足，給出一種茄子花藥培養誘導單倍體植株的培養基及其方法，通過這種方法可快速誘導茄子花藥形成愈傷組織，提高愈傷組織的誘導分化率和單倍體植株的加倍率，從而豐富適宜的茄子花藥培養條件，為建立高效的茄子花藥培養植株再生體系奠定基礎。

????為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

???一種茄子花藥培養誘導單倍體植株的培養基，其特征在于：所述培養基包括茄子花藥培養愈傷組織誘導培養基和愈傷組織分化培養基，所述茄子花藥培養愈傷組織誘導培養基為：MS基本培養基，0.2-0.5mg/L?2,4-D，0.5-1mg/L?KT，5-10mg/L?Vc，3%蔗糖，5g/L瓊脂，PH值5.8；所述愈傷組織分化培養基為：MS基本培養基，0.01-0.05mg/L?IAA，1.0-2.0mg/L?6-BA，0.1-0.5g/L活性炭，2%蔗糖，5.5g/L瓊脂，PH值5.8。?

所述茄子花藥培養愈傷組織誘導培養基為：MS基本培養基，0.2mg/L?2,4-D，0.9mg/L?KT，10mg/L?Vc，3%蔗糖，5g/L瓊脂，PH值5.8；所述愈傷組織分化培養基為：MS基本培養基，0.02mg/L?IAA，2.0mg/L?6-BA，0.5g/L活性炭，2%蔗糖，5.5g/L瓊脂，PH值5.8。

????所述茄子花藥的培養包括如下步驟：

1）??????????從茄子植株上生長對茄或四門斗茄的位置上選取花蕾，花蕾中花藥細胞處于單核中期至單核靠邊期，花蕾直徑7-10mm，花藥為黃綠色偏綠；

2）??????????預處理：將采集回來的花蕾用防水袋或培養瓶封閉，置于4-5℃冷藏室保存12-24?h；

3）??????????滅菌：先用70%或者75%的酒精進行花蕾表面消毒30s，再用次氯酸鈉原液的體積濃度為7％溶液浸泡15-20min，其中次氯酸鈉原液中次氯酸鈉的質量濃度為10%，之后用無菌水洗滌3-4次，每次3min，然后用無菌紙吸干花蕾備用；

4）??????????接種：在無菌工作臺上從滅完菌的花蕾中輕輕剝取花藥，接種于裝有茄子花藥培養愈傷組織誘導培養基的Φ60mm培養皿中，每個培養皿裝有10mL培養基，每個培養皿接1-2個花蕾的花藥；

5）??????????熱激處理：將接種好花藥的培養皿放到培養箱內進行熱激處理，黑暗培養，熱激溫度為35~40℃，處理4~9d；

6）??????????花藥培養：經高溫熱激處理后的花藥，放置在25-28℃，光照強度1500-2000Lx、光照12-16h/d下培養，每隔15-20?d轉接次，30-40d出現愈傷組織；

7）??????????愈傷組織再生植株：當花藥中部或頂部愈傷組織塊長到直徑約10mm，將愈傷組織轉接到愈傷組織分化培養基上，每隔15-20?d切割繼代一次，30-35?d愈傷組織上開始分化出綠色芽點，繼代培養條件：光照強度1500-2000Lx、光照12-16h/d，溫度為25-28℃，經過繼代培養，45%-55%的愈傷組織分化為成熟的胚狀體直接生成根莖葉具全的完整小植株；