[發明專利]UPF0538蛋白多克隆抗體的獲取方法

無效

• 申請號: 201410311523.8
• 申請日: 2014-07-02
• 公開（公告）號: CN104031931A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 胡江江;戚武林;高亞軍;張世馥;趙輔昆
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C07K16/18;C07K16/06
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.UPF0538蛋白多克隆抗體的獲取方法，其特征是，包括以下步驟：

（1）設計的含有酶切位點引物；

（2）利用設計的含有酶切位點引物將UPF0538基因進行PCR擴增，并通過酶切構建原核表達載體，從而獲得原核表達載體pET-28a(+)-UPF0538；

（3）再將原核表達載體pET-28a(+)-UPF0538轉化大腸桿菌E.coli?BL21(DE3)并用IPTG進行目的基因的誘導表達，獲得UPF0538蛋白；將UPF0538蛋白純化至85%以上；

（4）將純化后的UPF0538蛋白免疫到新西蘭大白兔上，在最后一次免疫的一周后頸動脈取血，收集血清；血清純化后，獲得目的UPF0538多克隆抗體。

2.根據權利要求1所述的UPF0538蛋白多克隆抗體的獲取方法，其特征是，所述酶切位點引物包括上游引物：5＇-GAGGAATTCATGGCTGCGGAGGAAG-3＇和下游引物：5＇-ACCCTCGAGTCACCAGGACGAGATG-3＇，上游引物序列中的GAATTC片段為EcoR?I酶切位點；下游引物序列中的CTCGAG片段為Xho?I酶切位點。

3.根據權利要求1所述的UPF0538蛋白多克隆抗體的獲取方法，其特征是，所述免疫兔為新西蘭大白兔上，首次免疫后，每隔7天加強免疫1次，抗原量為首次免疫用量的一半，共加強免疫3次，均采用頸部皮下多點注射，首次免疫用弗氏完全佐劑乳化，加強免疫用弗氏不完全佐劑乳化，最后一次免疫7?d后頸動脈取血，血清純化后，獲得目的UPF0538多克隆抗體。