[發明專利]一種快速構建血漿DNA測序文庫的方法和試劑盒有效
| 申請號： | 201410311003.7 | 申請日： | 2014-06-24 |
| 公開（公告）號： | CN105296602B | 公開（公告）日： | 2020-07-17 |
| 發明（設計）人： | 陳迪;李亞麗;李天成;石燕濱;張江花;吳凱 | 申請（專利權）人： | 北京貝瑞和康醫學檢驗實驗室有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6806 | 分類號： | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06;C40B40/06 |
| 代理公司： | 北京市金杜律師事務所 11256 | 代理人： | 孟凡宏;謝燕軍 |
| 地址： | 100015 北京市朝陽區京*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 構建 血漿 dna 序文 方法 試劑盒 | ||
1.用于第二代高通量測序平臺的血漿DNA測序文庫的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)抽提得到小于10ng的血漿DNA；
2)將血漿DNA進行末端補平，獲得末端補平后的血漿DNA；
3)將末端補平后的血漿DNA進行3’懸A，獲得3’懸A后的血漿DNA；
4)將3’懸A后的血漿DNA與測序接頭連接，獲得連接產物；
5)對連接產物進行純化，獲得純化產物，
其中所述純化產物不需PCR擴增反應步驟即可獲得所述血漿DNA測序文庫，
其中所述步驟2)和3)在一個反應體系中進行，中間沒有純化步驟。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4)通過選自以下的一種或兩種酶來進行：T4 DNA連接酶和T7 DNA連接酶。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述測序接頭為雙鏈的測序接頭。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述3’懸A采用klenow ex-酶、Taq酶、或klenow ex-酶與Taq酶的組合。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)采用T4 DNA聚合酶進行；且所述步驟3)采用Taq酶進行。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟3)和4)之間進行純化步驟；或步驟2)、3)和4)在一個反應體系中進行，中間沒有純化步驟。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟2)采用T4 DNA聚合酶進行；所述步驟3)采用Taq酶進行；且所述步驟4)采用T4 DNA連接酶和T7 DNA連接酶進行。
8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二代高通量測序平臺選自Roche/454FLX、Illumina/Hiseq、Miseq和Life Technologies/SOLID system、PGM或Proton。
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