[發(fā)明專利]一株產(chǎn)聚3-羥基丁酸酯的重組大腸桿菌及構(gòu)建方法及用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410310295.2
• 申請日: 2014-09-19
• 公開（公告）號: CN104195158A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳濤;林振泉;張妍;劉巧潔;王智文;趙學(xué)明
• 申請（專利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N1/21;C12P7/62;C12R1/19
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 陸藝

1.一株產(chǎn)聚3-羥基丁酸酯的重組大腸桿菌的構(gòu)建方法，其特征是包括如下步驟：

(1)設(shè)計(jì)以SEQ?ID?NO.1所示的代號為RBS5的核糖體結(jié)合位點(diǎn)，將Escherichia?coli?JM109的sdaA基因的啟動(dòng)子和核糖體結(jié)合位點(diǎn)序列置換為以SEQ?ID?NO.33所示的組成型啟動(dòng)子trc及RBS5，構(gòu)建工程菌株SD01；

(2)設(shè)計(jì)以SEQ?ID?NO.2所示的核糖體結(jié)合位點(diǎn)RBS1、以SEQ?ID?NO.3所示的核糖體結(jié)合位點(diǎn)RBS2、以SEQ?ID?NO.4所示的核糖體結(jié)合位點(diǎn)RBS3和以SEQ?ID?NO.5所示的核糖體結(jié)合位點(diǎn)RBS4；

(3)將RBS1和SEQ?ID?NO.36所示的基因pgk編碼序列連接成片段1、將RBS2和SEQ?ID?NO.37所示的基因serA編碼序列連接成片段2、將RBS3和SEQ?ID?NO.38所示的基因serB編碼序列連接成片段3、將RBS4和SEQ?ID?NO.39所示的基因serC編碼序列連接成片段4；

(4)將片段1、片段2、片段3和片段4通過重疊-延伸PCR融合為操縱子PSer，與SEQ?ID?NO.32所示的含啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列Trc-162一同整合到步驟(1)獲得的工程菌株SD01的基因組serC基因-58bp位點(diǎn)，得到工程菌株SD02；

(5)在菌株SD02的編碼丙酮酸脫氫酶復(fù)合體aceEF操縱子基因上游48bp插入SEQ?ID?NO.32所示序列，構(gòu)建工程菌株SD06；

(6)將含有PHB合成途徑基因的質(zhì)粒pBHR68導(dǎo)入SD06，得到基因型為E.coli?JM109,Ptrc-RBS5-sdaA,Trc-162-RBS1-pgk-RBS2-serA-RBS3-serB-RBS4-serC,Trc-162-aceEF,pBHR68,amp^r，簡稱為含pBHR68E.coli?SD06的產(chǎn)聚3-羥基丁酸酯的重組大腸桿菌。

2.權(quán)利要求1的方法構(gòu)建的一株產(chǎn)聚3-羥基丁酸酯的重組大腸桿菌。

3.權(quán)利要求2的一株產(chǎn)聚3‐羥基丁酸酯的重組大腸桿菌在發(fā)酵生產(chǎn)聚3‐羥基丁酸酯的用途。