[發(fā)明專(zhuān)利]活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410308639.6
• 申請(qǐng)日: 2014-07-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104083769A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-10-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 巢偉;張桂紅;王和平;徐雷;黃嵐芬
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 湖南中岸生物藥業(yè)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61K47/42
• 分類(lèi)號(hào): A61K47/42;A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 北京風(fēng)雅頌專(zhuān)利代理有限公司 11403
• 代理人: 李弘

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

病毒等生物活性物質(zhì)及其相關(guān)制品的熱敏感性一直是活疫苗長(zhǎng)期保存的瓶頸。我國(guó)幅員遼闊，經(jīng)濟(jì)水平差異較大，運(yùn)輸、使用過(guò)程中疫苗短期暴露高溫環(huán)境(甚至45℃以上)的現(xiàn)象依然存在，所以對(duì)活疫苗的耐熱性能提出了更高的要求。

耐熱凍干保護(hù)劑考慮了活疫苗在較高溫度和較長(zhǎng)保存時(shí)間的情況下，凍干物質(zhì)可能產(chǎn)生的物理和化學(xué)變化對(duì)活疫苗存活的影響。目前，國(guó)內(nèi)已有部分生物制品在2～8℃條件保存，具有一定的耐熱能力，但還有相當(dāng)一部分生物制品仍處于低溫狀態(tài)保存，尚未開(kāi)發(fā)到2～8℃條件保存。

早在20世紀(jì)80年代發(fā)達(dá)國(guó)家就已開(kāi)始進(jìn)行耐熱保護(hù)劑的研究，目前他們的凍干活疫苗基本上使用耐熱保護(hù)劑，而且保護(hù)劑的研究和應(yīng)用屬于專(zhuān)利資料，各國(guó)都處于保密狀態(tài)。國(guó)內(nèi)獸用生物制品耐熱保護(hù)劑的研究起步較晚，近年來(lái)關(guān)于這方面的研究報(bào)道主要包括雞新城疫、雞傳染性法氏囊、雞馬立克氏病、雞傳染性支氣管炎、雞痘和豬瘟凍干活疫苗的耐熱保護(hù)劑研究，但尚未見(jiàn)豬乙型腦炎活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的相關(guān)報(bào)道。

另外，豬乙型腦炎活疫苗免疫機(jī)體后主要以細(xì)胞免疫為主，所以在進(jìn)行抗體監(jiān)測(cè)時(shí)，抗體上升的晚并持續(xù)的時(shí)間短，經(jīng)常會(huì)有免疫豬乙型腦炎活疫苗不久后暴發(fā)乙型腦炎病的情況。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提出一種活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑及其制備方法和應(yīng)用，以降低疫苗對(duì)溫度保存條件的要求，同時(shí)提高和延長(zhǎng)免疫動(dòng)物的抗體水平。

基于上述目的，本發(fā)明提供的活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑由明膠、蔗糖、Trolox、精氨酸、聚乙烯吡咯烷酮和注射用水組成。

可選地，所述活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑由以下原料按重量配比組成：

明膠1～10％，蔗糖2～10％，Trolox0.01～0.2％，精氨酸0.1～2％，聚乙烯吡咯烷酮0.5～8％，余量為注射用水。

優(yōu)選地，所述活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑由以下原料按重量配比組成：

明膠4～7％，蔗糖4～6％，Trolox0.05～0.15％，精氨酸0.5～1.5％，聚乙烯吡咯烷酮1～2％，余量為注射用水。

本發(fā)明還提供制備上述活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑的方法，所述制備方法是：

將明膠、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮依次溶于注射用水中，然后將溶液滅菌；

將Trolox、精氨酸依次溶于注射用水中，然后將溶液過(guò)濾除菌；

將所述滅菌后的溶液和所述過(guò)濾除菌后的溶液混合，即得到所述活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑。

較佳地，所述活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法是：

將明膠、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮依次溶于注射用水中，然后于110～130℃條件下將溶液滅菌10～40分鐘；

將Trolox、精氨酸依次溶于注射用水中，然后采用0.2～0.25μm濾膜將溶液過(guò)濾除菌；

將所述滅菌后的溶液和所述過(guò)濾除菌后的溶液的溫度分別恢復(fù)到20～30℃后，再混合均勻，即得到所述活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑。

本發(fā)明還提供上述活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑在活疫苗制備中的應(yīng)用，所述活疫苗為豬乙型腦炎活疫苗。

較佳地，所述應(yīng)用包括：

將所述活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑與豬乙型腦炎活疫苗病毒液按照體積比0.5～2:1～2混合；

將混合溶液的pH值調(diào)至7.5～7.8后進(jìn)行冷凍干燥，即得到豬乙型腦炎耐熱凍干保護(hù)劑活疫苗。

優(yōu)選地，所述冷凍干燥的步驟包括：

1)將活疫苗在常壓、溫度為-30℃以下的條件下保持1～3小時(shí)；

2)將活疫苗在真空度為5～15Pa、溫度為-20～-15℃條件下保持20～40分鐘；

3)將活疫苗在真空度為5～15Pa、溫度為-10～-5℃條件下保持10～15小時(shí)；

4)將活疫苗在真空度為5～15Pa、溫度為-2～2℃條件下保持1～3小時(shí)；

5)將活疫苗在真空度為5～15Pa、溫度為8～12℃條件下保溫1～3小時(shí)；

6)將活疫苗在真空度為5～15Pa、溫度為25～30℃條件下保溫8～12小時(shí)；

在步驟2)～步驟6)的凍干過(guò)程中，冷凝器溫度保持在-50～-70℃。

較佳地，所述豬乙型腦炎病毒效價(jià)≥10^7.5TCID₅₀/mL。

較佳地，先將所述耐熱凍干保護(hù)劑和豬乙型腦炎病毒液的溫度分別恢復(fù)到15～20℃，再混合均勻。