[發明專利]一種測定血漿中5’-甲氧基-3’, 4’-亞甲二氧苯基桂皮酸異丁基酰胺濃度的方法

有效

• 申請號: 201410303081.2
• 申請日: 2014-06-27
• 公開（公告）號: CN104076116A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發明（設計）人: 張軍;儲繼紅;李長印;居文政;吳婷;許美娟;劉史佳
• 申請（專利權）人: 江蘇省中醫院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

1.一種測定血漿中5’-甲氧基-3’,4’-亞甲二氧苯基桂皮酸異丁基酰胺濃度的方法，其特征在于，血漿樣品經預處理后經液質聯用系統檢測其濃度，具體方法包括如下步驟：

(1)血漿樣品預處理：取血漿樣品，加入內標替硝唑溶液，加入乙酸乙酯萃取，吸取上層有機相，40℃下減壓濃縮揮干，加入80v/v％甲醇水溶液溶解，離心后取上清液；

(2)將步驟(1)預處理后的血漿樣品進行液相色譜分離：色譜柱為Agilent?ZOBAX?SB?C18，4.6×150mm，5μm；流動相：體積比為80:20的甲醇與0.2mmol·L^-1醋酸胺水溶液；流速：400mL·min^-1；柱溫：35℃；進樣量：5μL；洗脫方式為等度洗脫；

(3)質譜測定：條件為：離子源：電噴霧離子化電離源ESI；離子檢測方式：多反應監測；離子極性：正離子；離子源電壓IS：5000V；離子源溫度TEM：400℃；碰撞氣CAD：10L·min^-1；氣簾氣CUR：20L·min^-1；離子源Gas1：60L·min^-1；離子源Gas2：70L·min^-1；檢測對象的離子選擇通道：5’-甲氧基-3’,4’-亞甲二氧苯基桂皮酸異丁基酰胺，[M+H]+，m/z278.1/205.1，DP140，EP10，CE21，CXP9；內標替硝唑，[M+H]+，m/z248.1/128.0，DP100，EP10，CE30，CXP8；

(4)計算：采用內標法，以5’-甲氧基-3’,4’-亞甲二氧苯基桂皮酸異丁基酰胺和內標替硝唑的峰面積比值代入標準曲線方程計算5’-甲氧基-3’,4’-亞甲二氧苯基桂皮酸異丁基酰胺濃度。

2.根據權利要求1所述的測定血漿中5’-甲氧基-3’,4’-亞甲二氧苯基桂皮酸異丁基酰胺濃度的方法，其特征在于，步驟(1)中，于10.0mL玻璃試管中精密加入血漿樣品0.5mL，精密加入內標105.6ng·mL^-1替硝唑溶液20μL，旋渦10s，加入4.0mL乙酸乙酯，旋渦振蕩3min，3000r·min^-1離心10min，吸取上層有機相4mL，40℃下減壓濃縮揮干，加入100μL80v/v％甲醇水溶液復溶，旋渦1min，12000r·min^-1離心5min，吸取上清液。

3.根據權利要求1所述的測定血漿中5’-甲氧基-3’,4’-亞甲二氧苯基桂皮酸異丁基酰胺濃度的方法，其特征在于，所述的血漿為口服大葉蒟有效部位提取物后的血漿。

4.根據權利要求1所述的測定血漿中5’-甲氧基-3’,4’-亞甲二氧苯基桂皮酸異丁基酰胺濃度的方法，其特征在于，所述血漿為人或動物的血漿。