[發明專利]具有搖臂結構磁性多孔殼聚糖固定化酶載體的制備方法

無效

• 申請號: 201410299754.1
• 申請日: 2014-06-27
• 公開（公告）號: CN104046611A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 張秋禹;田雷;李偉;張寶亮;張和鵬
• 申請（專利權）人: 西北工業大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N11/10
• 代理公司: 西北工業大學專利中心 61204
• 代理人: 王鮮凱

1.一種具有搖臂結構磁性多孔殼聚糖固定化酶載體的制備方法，其特征在于步驟如下：

步驟1：配制質量分數為0.1～1％的Span-80液體石蠟溶液作為油相；

步驟2：將致孔劑和磁性納米粒子分散在水中，加入殼聚糖及冰醋酸，混合溶解配成水相；所述致孔劑、磁性納米粒子、殼聚糖、冰醋酸及水的質量比為1﹕1～0.4﹕1～6﹕10～50﹕400～1000；

步驟3：將得到的水相和油相按照質量比1﹕3～7混合攪拌20～60min，得到反相乳液；

步驟4：在反相乳液中加入戊二醛和0.1M的NaOH水溶液，升溫至70～90℃，再加入等比例的戊二醛，反應6～12h，得到分散有黑褐色顆粒的溶液；所述戊二醛、NaOH水溶液與殼聚糖的質量比為0.05～0.5﹕1～5﹕1；

步驟5：對步驟4中得到的分散有黑褐色顆粒的溶液在磁場下進行產物分離，得到黑褐色顆粒；采用乙醇、0.1M的鹽酸水溶液對黑褐色顆粒各洗滌三次，水洗至中性后干燥得磁性多孔殼聚糖固定化酶載體；

步驟6：將修飾劑溶于甲醇和醋酸混合溶液中，再加入磁性多孔殼聚糖固定化酶載體，在室溫下攪拌混合；所述甲醇和醋酸的體積比為1:1；所述修飾劑質量分數為0.2～1％；所述磁性多孔殼聚糖固定化酶載體的質量分數為2～10％；

步驟7：調節步驟6體系的PH值為6～6.5，反應2h后，經磁場分離，乙醇、水各洗滌3次，干燥后得到具有搖臂結構磁性多孔殼聚糖固定化酶載體。

2.根據權利要求1所述具有搖臂結構磁性多孔殼聚糖固定化酶載體的制備方法，其特征在于：所述步驟2的攪拌速度為100～500r/min。

3.根據權利要求1所述具有搖臂結構磁性多孔殼聚糖固定化酶載體的制備方法，其特征在于：所述步驟6的攪拌混合為1h，攪拌速度為100～300r/min。

4.根據權利要求1所述具有搖臂結構磁性多孔殼聚糖固定化酶載體的制備方法，其特征在于：所述步驟2中的致孔劑為CaCO₃、Mg(OH)₂、BaCO₃、Al(OH)₃、Ca(OH)₂、Al₂O₃中的一種或者幾種的任意比混合。

5.根據權利要求1所述具有搖臂結構磁性多孔殼聚糖固定化酶載體的制備方法，其特征在于：所述步驟2中磁性納米粒子為Fe₃O₄、Fe₂O₃、錳鐵氧體、鋅鐵氧體中的一種或幾種的任意比混合。

6.根據權利要求1所述具有搖臂結構磁性多孔殼聚糖固定化酶載體的制備方法，其特征在于：所述步驟6中的修飾劑為雙氨基聚乙二醇、雙羧基聚乙二醇、雙醛基聚乙二醇或羧基-聚乙二醇-氨基。