[發(fā)明專利]一種五指毛桃的組織培養(yǎng)快速繁殖方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410298080.3
• 申請(qǐng)日: 2014-06-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104106468A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李林軒;韋坤華;吳慶華;王曉峰;李翠;韋瑩;王一諾;繆劍華;林偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)藥用植物園
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 45104
• 代理人: 黃永校

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種五指毛桃的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。?

背景技術(shù)

五指毛桃，又名五爪龍、五指牛奶、土北芪等，來(lái)源于桑科植物粗葉榕Ficus?hirta?Vahl.的干燥根，為華南地區(qū)習(xí)用的中藥材。五指毛桃味辛、甘，性平，有健脾補(bǔ)肺、利濕舒筋之功，用于脾虛浮腫、食少無(wú)力、肺癆咳嗽、盜汗、風(fēng)濕痹痛、產(chǎn)后無(wú)乳等癥，是抗癆丸、喘息丸、復(fù)方川貝止咳糖漿、滋腎寧神丸、腦萎縮丸、宮炎平膠囊、宮炎平分散片、婦炎凈片等多種中成藥的重要原料。?

五指毛桃隨著市場(chǎng)需求量的不斷增加，自然繁殖緩慢，加上濫采亂挖，致使野生資源面臨枯竭。為確保五指毛桃資源的可持續(xù)利用，發(fā)展家種是唯一途徑。據(jù)此，通過(guò)現(xiàn)代生物技術(shù)對(duì)其進(jìn)行組織培養(yǎng)快繁技術(shù)進(jìn)行了研究，試圖獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)的種苗，為五指毛桃生產(chǎn)提供種源，以滿足生產(chǎn)上的需要。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種五指毛桃的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，它能夠快速繁殖出大量適合移栽的優(yōu)良五指毛桃種苗。?

本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案達(dá)到上述目的：一種五指毛桃的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟：?

(1)外植體的選擇與消毒：取五指毛桃葉片作為外植體，依次用5％洗潔精水溶液浸泡5-10min、線狀自來(lái)水沖洗10-15min、添加了2-3滴吐溫-20的100毫升0.1％升汞消毒8-10min、無(wú)菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體，所述無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水，?

(2)葉片分化獲得叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)：將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-26℃，光照強(qiáng)度1400-2000lux，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天，葉片分化后獲得叢生芽，其中MS培養(yǎng)基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.1-0.5mg/L的NAA、0.1-0.5mg/L的2,4-D、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，?

(3)叢生芽繁殖培養(yǎng)：將步驟(2)中得到的叢生芽置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-26℃，光照強(qiáng)度1400-2000lux，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)40天得到健壯植株，其中MS繁殖培養(yǎng)基中含0.1-0.5mg/L的IAA、0.1-0.5mg/L的KT、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，?

(4)無(wú)菌苗生根培養(yǎng)：將步驟(2)中得到的叢生芽切成單芽置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-26℃，光照強(qiáng)度1400-2000lux，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)40天得到帶根的完整植株，其中1/2MS生根培養(yǎng)基中含0.5-1.5mg/L的IBA、0.1-0.5mg/L的NAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，?

(5)煉苗與移栽：步驟(4)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25℃的室內(nèi)打開(kāi)瓶蓋，在瓶中加入少量自來(lái)水，煉苗2-4天，表面角質(zhì)形成后將苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到按質(zhì)量比為泥炭土:珍珠巖＝1:1的基質(zhì)中，在該基質(zhì)中生長(zhǎng)一個(gè)月后移栽大田。移栽后一個(gè)星期內(nèi)，每天早8點(diǎn)到晚6點(diǎn)噴霧3-5次，每次10min，此后每天早8點(diǎn)、晚6點(diǎn)各噴霧1次，每次10min；移栽時(shí)的溫度條件為20-28℃，相對(duì)濕度75-80％，遮陽(yáng)率為75％。?

本發(fā)明的突出優(yōu)點(diǎn)在于：?

(1)通過(guò)生物技術(shù)對(duì)五指毛桃進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖，在短時(shí)間內(nèi)培育出大量可供大田栽培的五指毛桃幼苗，顯著提高了五指毛桃種苗的繁殖系數(shù)和種苗質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)，滿足生產(chǎn)上的需要。?

(2)在MS繁殖培養(yǎng)基中添加0.1-0.5mg/L的激動(dòng)素KT可促進(jìn)叢生芽的分化；添加濃度為0.1-0.5mg/L的生長(zhǎng)激素吲哚-3-乙酸IAA可促進(jìn)叢生芽的生長(zhǎng)；?

在1/2MS生根培養(yǎng)基上組合使用濃度為0.5-1.5mg/L的吲哚丁酸IBA和0.1-0.5mg/L的生長(zhǎng)素萘乙酸NAA，可獲得帶根的完整植株，這些植株經(jīng)煉苗后可直接移栽到泥炭土+珍珠巖(1:1)的基質(zhì)。?

(3)采用本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法，得到的單芽增殖系數(shù)達(dá)到5-8倍，獲得的組培苗生根率達(dá)到100％，每株平均帶6-8個(gè)根，移栽泥炭土+珍珠巖(1:1)的基質(zhì)中活率在94％以上；快速、便捷、高效地進(jìn)行五指毛桃組織培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)五指毛桃組培種苗的規(guī)?；a(chǎn)。?

具體實(shí)施方式