[發(fā)明專利]海馬的鑒定方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410294756.1
• 申請(qǐng)日: 2014-06-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104017899A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 國(guó)錦琳;溫瓏蓮;侯飛俠;萬(wàn)德光;彭成
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 成都希盛知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51226
• 代理人: 柯海軍;武森濤

1.海馬的鑒定方法，其特征在于，包括如下步驟：

a、提取海馬總DNA；

b、PCR擴(kuò)增：對(duì)海馬總DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物為COI基因序列；

c、PCR產(chǎn)物測(cè)序；

d、序列比對(duì)，確定海馬種類。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海馬的鑒定方法，其特征在于：所述a步驟采用試劑盒法提取海馬總DNA。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海馬的鑒定方法，其特征在于：所述b步驟中PCR擴(kuò)增的引物為FishF1、FishF2、FishR1和FishR2；其中，F(xiàn)ishF1序列如Seq?ID?NO.1所示，F(xiàn)ishF2序列如Seq?ID?NO.2所示，F(xiàn)ishR1序列如Seq?ID?NO.3所示，F(xiàn)ishR2序列如Seq?ID?NO.4所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的海馬的鑒定方法，其特征在于：所述PCR擴(kuò)增體系為25μl，其中，2×PCR?Mix?Master12.5ul，F(xiàn)ishF1?1ul，F(xiàn)ishF2?1ul，F(xiàn)ishR1?1ul，F(xiàn)ishR2?1ul，海馬總DNA?2ul，ddH₂O補(bǔ)足至25ul。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的海馬的鑒定方法，其特征在于，PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性2min；94℃0.5min；50℃0.5min；72℃1min；共35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海馬的鑒定方法，其特征在于：在a、b步驟之間，還對(duì)海馬總DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)，其采用濃度為1.0％的瓊脂糖凝膠在恒壓150v、電流400mA的條件下進(jìn)行電泳，電泳時(shí)間為10～20min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海馬的鑒定方法，其特征在于：在b、c步驟之間，還對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)，其采用濃度為1.0％的瓊脂糖凝膠在恒壓150v、電流400mA的條件下進(jìn)行電泳，電泳時(shí)間為10～20min。