[發(fā)明專利]一種去除胰蛋白酶中的內(nèi)毒素的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410294257.2
• 申請日: 2014-06-26
• 公開（公告）號: CN104017792A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃臻輝;周建華;周偉潔;琚姝;王克平;汪雅雯;孫源遠(yuǎn)
• 申請（專利權(quán)）人: 上海第一生化藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C12N9/76
• 分類號: C12N9/76
• 代理公司: 上海弼興律師事務(wù)所 31283
• 代理人: 朱水平;王衛(wèi)彬

1.一種去除胰蛋白酶中的內(nèi)毒素的方法，其包括下述步驟：將胰蛋白酶濾餅溶解于水中，超濾濃縮得到濃縮液，依次加入磷酸鹽水溶液和鈣鹽水溶液，調(diào)節(jié)pH值為8～9，離心，即可。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的胰蛋白酶濾餅通過下述步驟得到：將胰蛋白酶原料用水溶解，加入硫酸調(diào)節(jié)pH值為2～3，加入飽和硫酸銨溶液鹽析，加入硼酸緩沖液調(diào)節(jié)pH值為7.5～7.7，再加入胰蛋白酶進(jìn)行活化，用硫酸調(diào)節(jié)pH值為2.5～3.5，加入固體硫酸銨進(jìn)行鹽析，即得到胰蛋白酶濾餅。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的水與所述的胰蛋白酶濾餅的體積質(zhì)量比為8～12ml/g；

和/或，所述的超濾濃縮采用的超濾膜為德國賽多利斯公司的Hydrosart超濾膜，截留相對分子質(zhì)量是5kDa或10kDa；

和/或，所述的超濾濃縮得到的濃縮液的體積為超濾濃縮前體積的0.1～0.3倍。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的磷酸鹽為磷酸鈉和/或磷酸鉀；

和/或，所述的鈣鹽為醋酸鈣和/或氯化鈣。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的磷酸鹽水溶液與所述的濃縮液的體積比為(0.1～0.2)：1；

和/或，所述的鈣鹽水溶液與所述的磷酸鹽水溶液的體積比為(0.5～0.7)：1。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的磷酸鹽水溶液的濃度為0.2～0.5mol/L；

和/或，所述的鈣鹽水溶液的濃度為0.8～1.5mol/L。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的磷酸鹽與所述的鈣鹽的摩爾比為1：(0.5～2)。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述的磷酸鹽與所述的鈣鹽的摩爾比為1：1.5。

9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的離心的轉(zhuǎn)速為3000～4000rpm。

10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的離心為冷凍離心10～30min；所述的冷凍離心的溫度較佳地為4～10℃。