[發(fā)明專利]一種豬附紅細(xì)胞體病疫苗及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410288734.4
• 申請(qǐng)日: 2014-06-24
• 公開（公告）號(hào): CN104027796A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈杏林;唐麗;李曉云
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K39/02
• 分類號(hào): A61K39/02;A61P31/04;C12N1/20;C12R1/35
• 代理公司: 長(zhǎng)沙市融智專利事務(wù)所 43114
• 代理人: 袁靖

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于家畜疫苗技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種豬附紅細(xì)胞體病預(yù)防的疫苗及其制備方法,是獸醫(yī)領(lǐng)域的一種有效、安全的疫苗。?

背景技術(shù)

豬附紅細(xì)胞體病是由豬附紅細(xì)胞體(M.suis)引起，具有宿主專一性特點(diǎn)，常引起機(jī)體發(fā)熱、溶血、黃疸等癥狀的人獸共患傳染病。該病可引起新生仔豬和斷奶仔豬虛弱和貧血，肥育豬生長(zhǎng)緩慢，母豬繁殖障礙、受胎率低、不發(fā)情、流產(chǎn)和死胎等綜合性癥狀。它不僅導(dǎo)致畜產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)量的降低,還可造成豬只大批死亡。更嚴(yán)重的是感染附紅細(xì)胞體病的豬只免疫機(jī)能大大下降,會(huì)繼發(fā)感染其他的病癥，比如斷奶野豬圓環(huán)病毒與豬附紅細(xì)胞體、豬附紅細(xì)胞體與皮膚疥螨混合性感染、非典型性豬瘟與豬附紅細(xì)胞體病混合感染等，這些混合感染對(duì)該病的治療增加了難度，給養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。此病感染極具普遍性，且為隱性感染，給我國養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴(yán)重的隱患與危害，因此，對(duì)M.suis病的預(yù)防是極為重要的。但是，目前仍缺少一種能夠廣泛應(yīng)用于臨床的安全、有效、生產(chǎn)成本較低的疫苗對(duì)該病進(jìn)行預(yù)防。?

進(jìn)年來，也有豬附紅細(xì)胞體疫苗的研究。呂舟、鄭秀紅等研究的亞單位疫苗，對(duì)小鼠有一定的效果，但疫苗能否在其他動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生免疫保護(hù)作用還有待于進(jìn)一步研究，其臨床意義甚少；Hoelzle?K等研究的疫苗可產(chǎn)生強(qiáng)的免疫水平，但不能起保護(hù)作用。此滅活疫苗結(jié)合了臨床和實(shí)驗(yàn)室兩個(gè)方面對(duì)其免疫效果和保護(hù)作用的研究，從特異性和非特異性2個(gè)方面等對(duì)其免疫效果進(jìn)行檢測(cè)。?

基于上述問題，本發(fā)明提供了一種能夠預(yù)防豬附紅細(xì)胞體的滅活疫苗及其制備方法，為豬附紅細(xì)胞體病預(yù)防提供了理論基礎(chǔ)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決目前市場(chǎng)和臨床上沒有一種安全、有效的預(yù)防豬附紅細(xì)胞體的疫苗，而提供一種豬附紅細(xì)胞體滅活疫苗及其制備方法。?

一種豬附紅細(xì)胞體病疫苗的制備方法，包括以下步驟：?

將感染了豬附紅細(xì)胞體的紅細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基配方:60-65wt％PPLO肉湯基?礎(chǔ)液、5-10wt％M199基礎(chǔ)液，9-10wt％的0.25wt％的酵母浸出液、2.5-3.5wt％濃度為0.5g/mL的葡萄糖溶液、1-2wt％濃度為4.5mg/mL的L-絲氨酸、0.5-1wt％濃度為4mg/mL的NAD、10-15wt％滅活豬血清組成；培養(yǎng)過程中用超聲波解離豬附紅細(xì)胞體成單個(gè)病原體進(jìn)行培養(yǎng)，檢測(cè)其個(gè)數(shù)達(dá)到2.5-3.0x10⁹個(gè)/mL；然后將培養(yǎng)得到的豬附紅細(xì)胞體滅活用于制備滅活疫苗。?

培養(yǎng)基配方優(yōu)選：60wt％PPLO肉湯基礎(chǔ)液、10wt％M199基礎(chǔ)液，10wt％的濃度為0.25g/mL酵母浸出液、2.5wt％濃度為0.5g/mL的葡萄糖溶液、2wt％濃度為4.5mg/mL的L-絲氨酸、0.5wt％的濃度為4mg/mL的NAD、15wt％滅活豬血清組成。?

所述的豬附紅細(xì)胞體病疫苗的制備方法：?

將感染了豬附紅細(xì)胞體的紅細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)基中,置于37℃、含5％-10％CO₂的培養(yǎng)箱培養(yǎng)，72h后紅細(xì)胞溶血后更換培養(yǎng)基，再連續(xù)培養(yǎng)30d，每6d更換一次培養(yǎng)液，充分減少紅細(xì)胞膜成份，用超聲波解離豬附紅細(xì)胞體成單個(gè)病原體后繼續(xù)培養(yǎng)增殖，再次超聲解離，檢測(cè)其個(gè)數(shù)。?

上述方法采用甲醛滅活豬附紅細(xì)胞體。具體是采用濃度為0.3-0.5％的甲醛在37℃滅活豬附紅細(xì)胞體20-28h。優(yōu)選采用濃度為0.4％的甲醛在37℃滅活豬附紅細(xì)胞體24h。?

上述方法將滅活的豬附紅細(xì)胞體作為水相與油相混合均勻，乳化后得到水包油的滅活疫苗即為制備好的滅活疫苗。具體是將油相和水相按體積1:1-2:1混合，抗原的濃度為4.28x10⁸-4.48x10⁸個(gè)/mL。優(yōu)選將油相和水相按體積1:1混合，抗原的濃度為4.38x10⁸個(gè)/mL。?

一種豬附紅細(xì)胞體病疫苗，是由上述方法制備得到的疫苗。?