[發(fā)明專利]一種豬附紅細(xì)胞體病疫苗及其制備方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201410288734.4 | 申請(qǐng)日: | 2014-06-24 |
| 公開(公告)號(hào): | CN104027796A | 公開(公告)日: | 2014-09-10 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 賈杏林;唐麗;李曉云 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào): | A61K39/02 | 分類號(hào): | A61K39/02;A61P31/04;C12N1/20;C12R1/35 |
| 代理公司: | 長(zhǎng)沙市融智專利事務(wù)所 43114 | 代理人: | 袁靖 |
| 地址: | 410128 *** | 國省代碼: | 湖南;43 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 種豬 細(xì)胞體 疫苗 及其 制備 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于家畜疫苗技術(shù)領(lǐng)域,特別涉及一種豬附紅細(xì)胞體病預(yù)防的疫苗及其制備方法,是獸醫(yī)領(lǐng)域的一種有效、安全的疫苗。?
背景技術(shù)
豬附紅細(xì)胞體病是由豬附紅細(xì)胞體(M.suis)引起,具有宿主專一性特點(diǎn),常引起機(jī)體發(fā)熱、溶血、黃疸等癥狀的人獸共患傳染病。該病可引起新生仔豬和斷奶仔豬虛弱和貧血,肥育豬生長(zhǎng)緩慢,母豬繁殖障礙、受胎率低、不發(fā)情、流產(chǎn)和死胎等綜合性癥狀。它不僅導(dǎo)致畜產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)量的降低,還可造成豬只大批死亡。更嚴(yán)重的是感染附紅細(xì)胞體病的豬只免疫機(jī)能大大下降,會(huì)繼發(fā)感染其他的病癥,比如斷奶野豬圓環(huán)病毒與豬附紅細(xì)胞體、豬附紅細(xì)胞體與皮膚疥螨混合性感染、非典型性豬瘟與豬附紅細(xì)胞體病混合感染等,這些混合感染對(duì)該病的治療增加了難度,給養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。此病感染極具普遍性,且為隱性感染,給我國養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴(yán)重的隱患與危害,因此,對(duì)M.suis病的預(yù)防是極為重要的。但是,目前仍缺少一種能夠廣泛應(yīng)用于臨床的安全、有效、生產(chǎn)成本較低的疫苗對(duì)該病進(jìn)行預(yù)防。?
進(jìn)年來,也有豬附紅細(xì)胞體疫苗的研究。呂舟、鄭秀紅等研究的亞單位疫苗,對(duì)小鼠有一定的效果,但疫苗能否在其他動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生免疫保護(hù)作用還有待于進(jìn)一步研究,其臨床意義甚少;Hoelzle?K等研究的疫苗可產(chǎn)生強(qiáng)的免疫水平,但不能起保護(hù)作用。此滅活疫苗結(jié)合了臨床和實(shí)驗(yàn)室兩個(gè)方面對(duì)其免疫效果和保護(hù)作用的研究,從特異性和非特異性2個(gè)方面等對(duì)其免疫效果進(jìn)行檢測(cè)。?
基于上述問題,本發(fā)明提供了一種能夠預(yù)防豬附紅細(xì)胞體的滅活疫苗及其制備方法,為豬附紅細(xì)胞體病預(yù)防提供了理論基礎(chǔ)。?
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決目前市場(chǎng)和臨床上沒有一種安全、有效的預(yù)防豬附紅細(xì)胞體的疫苗,而提供一種豬附紅細(xì)胞體滅活疫苗及其制備方法。?
一種豬附紅細(xì)胞體病疫苗的制備方法,包括以下步驟:?
將感染了豬附紅細(xì)胞體的紅細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)基中,培養(yǎng)基配方:60-65wt%PPLO肉湯基?礎(chǔ)液、5-10wt%M199基礎(chǔ)液,9-10wt%的0.25wt%的酵母浸出液、2.5-3.5wt%濃度為0.5g/mL的葡萄糖溶液、1-2wt%濃度為4.5mg/mL的L-絲氨酸、0.5-1wt%濃度為4mg/mL的NAD、10-15wt%滅活豬血清組成;培養(yǎng)過程中用超聲波解離豬附紅細(xì)胞體成單個(gè)病原體進(jìn)行培養(yǎng),檢測(cè)其個(gè)數(shù)達(dá)到2.5-3.0x109個(gè)/mL;然后將培養(yǎng)得到的豬附紅細(xì)胞體滅活用于制備滅活疫苗。?
培養(yǎng)基配方優(yōu)選:60wt%PPLO肉湯基礎(chǔ)液、10wt%M199基礎(chǔ)液,10wt%的濃度為0.25g/mL酵母浸出液、2.5wt%濃度為0.5g/mL的葡萄糖溶液、2wt%濃度為4.5mg/mL的L-絲氨酸、0.5wt%的濃度為4mg/mL的NAD、15wt%滅活豬血清組成。?
所述的豬附紅細(xì)胞體病疫苗的制備方法:?
將感染了豬附紅細(xì)胞體的紅細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)基中,置于37℃、含5%-10%CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng),72h后紅細(xì)胞溶血后更換培養(yǎng)基,再連續(xù)培養(yǎng)30d,每6d更換一次培養(yǎng)液,充分減少紅細(xì)胞膜成份,用超聲波解離豬附紅細(xì)胞體成單個(gè)病原體后繼續(xù)培養(yǎng)增殖,再次超聲解離,檢測(cè)其個(gè)數(shù)。?
上述方法采用甲醛滅活豬附紅細(xì)胞體。具體是采用濃度為0.3-0.5%的甲醛在37℃滅活豬附紅細(xì)胞體20-28h。優(yōu)選采用濃度為0.4%的甲醛在37℃滅活豬附紅細(xì)胞體24h。?
上述方法將滅活的豬附紅細(xì)胞體作為水相與油相混合均勻,乳化后得到水包油的滅活疫苗即為制備好的滅活疫苗。具體是將油相和水相按體積1:1-2:1混合,抗原的濃度為4.28x108-4.48x108個(gè)/mL。優(yōu)選將油相和水相按體積1:1混合,抗原的濃度為4.38x108個(gè)/mL。?
一種豬附紅細(xì)胞體病疫苗,是由上述方法制備得到的疫苗。?
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