[發明專利]一種豬附紅細胞體病疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201410288734.4
• 申請日: 2014-06-24
• 公開（公告）號: CN104027796A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 賈杏林;唐麗;李曉云
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: A61K39/02
• 分類號: A61K39/02;A61P31/04;C12N1/20;C12R1/35
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所 43114
• 代理人: 袁靖

技術領域

本發明屬于家畜疫苗技術領域，特別涉及一種豬附紅細胞體病預防的疫苗及其制備方法,是獸醫領域的一種有效、安全的疫苗。?

背景技術

豬附紅細胞體病是由豬附紅細胞體(M.suis)引起，具有宿主專一性特點，常引起機體發熱、溶血、黃疸等癥狀的人獸共患傳染病。該病可引起新生仔豬和斷奶仔豬虛弱和貧血，肥育豬生長緩慢，母豬繁殖障礙、受胎率低、不發情、流產和死胎等綜合性癥狀。它不僅導致畜產品質量和產量的降低,還可造成豬只大批死亡。更嚴重的是感染附紅細胞體病的豬只免疫機能大大下降,會繼發感染其他的病癥，比如斷奶野豬圓環病毒與豬附紅細胞體、豬附紅細胞體與皮膚疥螨混合性感染、非典型性豬瘟與豬附紅細胞體病混合感染等，這些混合感染對該病的治療增加了難度，給養豬業帶來嚴重的經濟損失。此病感染極具普遍性，且為隱性感染，給我國養豬業帶來嚴重的隱患與危害，因此，對M.suis病的預防是極為重要的。但是，目前仍缺少一種能夠廣泛應用于臨床的安全、有效、生產成本較低的疫苗對該病進行預防。?

進年來，也有豬附紅細胞體疫苗的研究。呂舟、鄭秀紅等研究的亞單位疫苗，對小鼠有一定的效果，但疫苗能否在其他動物體內產生免疫保護作用還有待于進一步研究，其臨床意義甚少；Hoelzle?K等研究的疫苗可產生強的免疫水平，但不能起保護作用。此滅活疫苗結合了臨床和實驗室兩個方面對其免疫效果和保護作用的研究，從特異性和非特異性2個方面等對其免疫效果進行檢測。?

基于上述問題，本發明提供了一種能夠預防豬附紅細胞體的滅活疫苗及其制備方法，為豬附紅細胞體病預防提供了理論基礎。?

發明內容

本發明的目的是為了解決目前市場和臨床上沒有一種安全、有效的預防豬附紅細胞體的疫苗，而提供一種豬附紅細胞體滅活疫苗及其制備方法。?

一種豬附紅細胞體病疫苗的制備方法，包括以下步驟：?

將感染了豬附紅細胞體的紅細胞接種到細胞培養基中，培養基配方:60-65wt％PPLO肉湯基?礎液、5-10wt％M199基礎液，9-10wt％的0.25wt％的酵母浸出液、2.5-3.5wt％濃度為0.5g/mL的葡萄糖溶液、1-2wt％濃度為4.5mg/mL的L-絲氨酸、0.5-1wt％濃度為4mg/mL的NAD、10-15wt％滅活豬血清組成；培養過程中用超聲波解離豬附紅細胞體成單個病原體進行培養，檢測其個數達到2.5-3.0x10⁹個/mL；然后將培養得到的豬附紅細胞體滅活用于制備滅活疫苗。?

培養基配方優選：60wt％PPLO肉湯基礎液、10wt％M199基礎液，10wt％的濃度為0.25g/mL酵母浸出液、2.5wt％濃度為0.5g/mL的葡萄糖溶液、2wt％濃度為4.5mg/mL的L-絲氨酸、0.5wt％的濃度為4mg/mL的NAD、15wt％滅活豬血清組成。?

所述的豬附紅細胞體病疫苗的制備方法：?

將感染了豬附紅細胞體的紅細胞接種到細胞培養基中,置于37℃、含5％-10％CO₂的培養箱培養，72h后紅細胞溶血后更換培養基，再連續培養30d，每6d更換一次培養液，充分減少紅細胞膜成份，用超聲波解離豬附紅細胞體成單個病原體后繼續培養增殖，再次超聲解離，檢測其個數。?

上述方法采用甲醛滅活豬附紅細胞體。具體是采用濃度為0.3-0.5％的甲醛在37℃滅活豬附紅細胞體20-28h。優選采用濃度為0.4％的甲醛在37℃滅活豬附紅細胞體24h。?

上述方法將滅活的豬附紅細胞體作為水相與油相混合均勻，乳化后得到水包油的滅活疫苗即為制備好的滅活疫苗。具體是將油相和水相按體積1:1-2:1混合，抗原的濃度為4.28x10⁸-4.48x10⁸個/mL。優選將油相和水相按體積1:1混合，抗原的濃度為4.38x10⁸個/mL。?

一種豬附紅細胞體病疫苗，是由上述方法制備得到的疫苗。?