[發(fā)明專利]一種豬附紅細(xì)胞體病疫苗及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410288734.4
• 申請日: 2014-06-24
• 公開（公告）號: CN104027796A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 賈杏林;唐麗;李曉云
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A61K39/02
• 分類號: A61K39/02;A61P31/04;C12N1/20;C12R1/35
• 代理公司: 長沙市融智專利事務(wù)所 43114
• 代理人: 袁靖

1.一種豬附紅細(xì)胞體病疫苗的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將感染了豬附紅細(xì)胞體的紅細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基配方:60-65wt％PPLO肉湯基礎(chǔ)液、5-10wt％M199基礎(chǔ)液，9-10wt％的0.25wt％的酵母浸出液、2.5-3.5wt％濃度為0.5g/mL的葡萄糖溶液、1-2wt％濃度為4.5mg/mL的L-絲氨酸、0.5-1wt％濃度為4mg/mL的NAD、10-15wt％滅活豬血清組成；培養(yǎng)過程中用超聲波解離豬附紅細(xì)胞體成單個病原體進(jìn)行培養(yǎng)，檢測其個數(shù)達(dá)到2.5-3.0x10⁹個/mL；然后將培養(yǎng)得到的豬附紅細(xì)胞體滅活用于制備滅活疫苗。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬附紅細(xì)胞體病疫苗的制備方法，其特征在于，培養(yǎng)基配方：60wt％PPLO肉湯基礎(chǔ)液、10wt％M199基礎(chǔ)液，10wt％的濃度為0.25g/mL酵母浸出液、2.5wt％濃度為0.5g/mL的葡萄糖溶液、2wt％濃度為4.5mg/mL的L-絲氨酸、0.5wt％的濃度為4mg/mL的NAD、15wt％滅活豬血清組成。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬附紅細(xì)胞體病疫苗的制備方法，其特征在于，

將感染了豬附紅細(xì)胞體的紅細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)基中,置于37℃、含5％-10％CO₂的培養(yǎng)箱培養(yǎng)，72h后紅細(xì)胞溶血后更換培養(yǎng)基，再連續(xù)培養(yǎng)30d，每6d更換一次培養(yǎng)液，充分減少紅細(xì)胞膜成份，用超聲波解離豬附紅細(xì)胞體成單個病原體后繼續(xù)培養(yǎng)增殖，再次超聲解離，檢測其個數(shù)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬附紅細(xì)胞體病疫苗的制備方法，其特征在于，

采用甲醛滅活豬附紅細(xì)胞體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的豬附紅細(xì)胞體病疫苗的制備方法，其特征在于，

采用濃度為0.3-0.5％的甲醛在37℃滅活豬附紅細(xì)胞體20-28h。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的豬附紅細(xì)胞體病疫苗的制備方法，其特征在于，

采用濃度為0.4％的甲醛在37℃滅活豬附紅細(xì)胞體24h。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬附紅細(xì)胞體病疫苗的制備方法，其特征在于，將滅活的豬附紅細(xì)胞體作為水相與油相混合均勻，乳化后得到水包油的滅活疫苗即為制備好的滅活疫苗。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的豬附紅細(xì)胞體病疫苗的制備方法，其特征在于，將油相和水相按體積1:1-2:1混合，抗原的濃度為4.28x10⁸-4.48x10⁸個/mL。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的豬附紅細(xì)胞體病疫苗的制備方法，其特征在于，將油相和水相按體積1:1混合，抗原的濃度為4.38x10⁸個/mL。

10.一種豬附紅細(xì)胞體病疫苗，是由權(quán)利要求1-9任一種方法制備得到的疫苗。