[發明專利]一種蠟樣芽孢桿菌及其應用

有效

• 申請號: 201410283436.6
• 申請日: 2014-06-23
• 公開（公告）號: CN104017761A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 阮海華;張西軒;王素英;李曄
• 申請（專利權）人: 天津商業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/54;C12P21/06;C12R1/085
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司 12107
• 代理人: 肖莉麗

1.一種蠟樣芽孢桿菌，拉丁文名稱為Bacillus?cereus，其保藏編號為：CGMCC?NO.8614。

2.一種權利要求1所述的蠟樣芽孢桿菌在生產含有膠原酶的酶液方面的應用，所得含有膠原酶的酶液中包含兩種分子量不同的膠原酶，即分子量為106kDa的膠原酶Ⅰ和分子量為95kDa的膠原酶Ⅱ。

3.一種權利要求2所產含有膠原酶的酶液在降解膠原蛋白和明膠方面的應用。

4.一種利用權利要求1所述的蠟樣芽孢桿菌降解膠原蛋白或明膠的方法，其特征在于，包括下述步驟：

(1)將權利要求1所述的蠟樣芽孢桿菌使用LB液體培養基擴大培養，然后離心除去菌體，得到粗酶液；在冰浴條件下向粗酶液中加入硫酸銨粉末，沉淀所得粗酶液中的蛋白，得到沉淀物；所得沉淀物用pH值為7.5的Tris-HCl緩沖液復溶，所得復溶溶液用pH值為7.5的Tris-HCl緩沖液在4℃條件下透析，透析后得到濃縮酶液；

(2)將含膠原蛋白和/或明膠的溶液與步驟(1)所得濃縮酶液混合后于37℃水浴條件下降解膠原蛋白和/或明膠。

5.根據權利要求4所述的利用蠟樣芽孢桿菌降解膠原蛋白或明膠的方法，其特征在于，所述含有膠原蛋白和/或明膠的溶液為魚鱗或魚皮或魚骨或牛骨或豬皮的提取液。

6.根據權利要求5所述的利用蠟樣芽孢桿菌降解膠原蛋白或明膠的方法，其特征在于，所述魚鱗的提取液通過下述方法得到：

(1)將干燥的魚鱗浸于HCl溶液中在室溫下攪拌脫鈣；再將脫鈣后的魚鱗浸于Na₂CO₃溶液中，在室溫條件下攪拌，使膠原蛋白中的膠原纖維的致密結構變疏松；最后，用蒸餾水將魚鱗反復漂洗至中性；

(2)將漂洗至中性的魚鱗與蒸餾水混合，在壓力為102.9kPa，溫度為121℃條件下提取15-20min；待提取液冷卻至室溫后，在室溫下離心去除提取液中的雜質，所得上清液即為魚鱗的提取液。

7.根據權利要求6所述的利用蠟樣芽孢桿菌降解膠原蛋白或明膠的方法，其特征在于，所述魚鱗的脫鈣的方法為：將清洗后干燥的魚鱗浸于0.5mol/L的HCl溶液中在室溫條件下攪拌脫鈣2-4h。

8.根據權利要求4所述的利用蠟樣芽孢桿菌降解膠原蛋白或明膠的方法，其特征在于，含有膠原蛋白或明膠的提取液與濃縮酶液等體積混合。

9.根據權利要求5所述的利用蠟樣芽孢桿菌降解膠原蛋白或明膠的方法，其特征在于，所述魚皮、魚骨、牛骨或豬皮的提取液的制備方法為：將魚皮、魚骨、牛骨或豬皮作為原材料除去雜質后用電熱鼓風干燥箱充分干燥；將每4g干燥后的原材料與100mL超純水混合，在壓力為102.9kPa，溫度為121℃條件下提取15-20min；待提取體系冷卻至室溫后，在室溫下離心去除原材料提取液中的雜質，所得上清液即分別為魚皮、魚骨、牛骨或豬皮的提取液。

10.根據權利要求4-9中任一項所述的利用蠟樣芽孢桿菌降解膠原蛋白或明膠的方法，其特征在于，蠟樣芽孢桿菌在LB液體培養基中擴大培養的培養時間為24h；Tris-HCl緩沖液濃度為50mmol/L，按照每1mg沉淀用5mL?Tris-HCl緩沖液的比例復溶沉淀。