[發(fā)明專利]一種用于制備肝細(xì)胞靶向轉(zhuǎn)遞小干擾RNA的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201410283413.5 | 申請(qǐng)日： | 2014-06-23 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN104087574B | 公開（公告）日： | 2019-08-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 武文斌;巴劍波;陳雙紅;郝蕙玲;孫錦程;徐雄利;呂鴻雁 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國人民解放軍海軍醫(yī)學(xué)研究所 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/10 | 分類號(hào)： | C12N15/10;C12N15/113 |
| 代理公司： | 上海容慧專利代理事務(wù)所(普通合伙) 31287 | 代理人： | 王裕 |
| 地址： | 200433 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 制備 肝細(xì)胞 靶向 轉(zhuǎn)遞 干擾 rna 方法 | ||
1.一種用于制備肝細(xì)胞靶向轉(zhuǎn)遞小干擾RNA的方法，反應(yīng)底物包括乳糖酸或半乳糖衍生物、末端氨基修飾RNAi多核苷酸和EDC，其中，乳糖酸或半乳糖衍生物作為耦合反應(yīng)的羧基供體和靶向耦合物的半乳糖基供體，末端氨基標(biāo)記RNAi多核苷酸作為耦合反應(yīng)的伯氨基供體，EDC作為零長度交聯(lián)劑，其特征在于所述方法在0.05M～0.1M MES緩沖液pH 4.5中進(jìn)行，乳糖酸與末端氨基標(biāo)記RNAi多核苷酸摩爾比例為1∶1～2000∶1，EDC與乳糖酸摩爾比例為1∶1～100∶1，所述RNAi多核苷酸為siRNA。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法為25mM乳糖酸、12.5μM末端氨基標(biāo)記RNAi多核苷酸與0.1M EDC三者混合于0.1M MES pH 4.5緩沖液中，短暫振蕩后離心，于25℃反應(yīng)2h或4℃過夜，使羧基與伯氨基發(fā)生縮合反應(yīng)，形成半乳糖化RNAi多核苷酸共價(jià)耦合物。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述RNAi多核苷酸可被化學(xué)修飾，該化學(xué)修飾包括:硫代磷酸酯核苷酸間連接、2'-O-甲基核糖核苷酸、2'-脫氧-2'-氟核糖核苷酸、2'-脫氧核糖核苷酸、5-C-甲基核苷酸、或倒置脫氧脫堿基殘基摻入。
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