[發(fā)明專利]一種用于篩選微生物胞外膠原酶的酶譜方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410279995.X
• 申請日: 2014-06-23
• 公開（公告）號: CN104049026A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 阮海華;張西軒;王素英;李曄
• 申請（專利權(quán)）人: 天津商業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 天津市三利專利商標(biāo)代理有限公司 12107
• 代理人: 肖莉麗

1.一種用于篩選微生物胞外膠原酶的酶譜方法，包括電泳和凝膠的處理步驟，其特征在于，所述電泳過程中所采用的凝膠為在10％SDS-PAGE凝膠中添加質(zhì)量體積比濃度為0.1％的Ⅰ型膠原蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于篩選微生物胞外膠原酶的酶譜方法，其特征在于，所述凝膠的處理過程為：電泳結(jié)束后先將凝膠用洗脫液在室溫條件下振蕩洗脫2次，隨后用漂洗液在室溫條件下振蕩漂洗2次，最后將凝膠用孵育液在37℃下靜置孵育12h；孵育結(jié)束后將凝膠先經(jīng)質(zhì)量體積比為0.1％的考馬斯亮藍(lán)R-250染色液染色1h，再經(jīng)脫色液室溫振蕩脫色直至透明條帶清晰；

所述洗脫液的組成為：由pH值為7.6、濃度為50mmol/L?Tris-HCl緩沖液、聚乙二醇辛基苯基醚和CaCl₂組成，所含聚乙二醇辛基苯基醚的體積百分比為2.5％，CaCl₂的濃度為5mmol/L；

所述漂洗液的組成為：由pH值為7.6、濃度為50mmol/L?Tris-HCl緩沖液和CaCl₂組成，CaCl₂的濃度為5mmol/L；

所述孵育液的組成為：pH值為7.6、濃度為50mmol/L?Tris-HCl緩沖液、十二烷基聚乙二醇醚、NaCl和CaCl₂，其中，十二烷基聚乙二醇醚的濃度為0.02％，NaCl的濃度為200mmol/L、CaCl₂的濃度為5mmol/L；

所述考馬斯亮藍(lán)染色液的組成為：1L考馬斯亮藍(lán)染色液中含有1.0g考馬斯亮藍(lán)R-250、450mL甲醇和100mL冰醋酸；

所述脫色液的組成為：1L脫色液中含有100mL無水甲醇和100mL冰乙酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于篩選微生物胞外膠原酶的酶譜方法，其特征在于，所述電泳過程中所采用的凝膠由濃縮膠和分離膠組成，所述分離膠的組成為：pH值為8.8、濃度為1.5mol/L的Tris-HCl緩沖液24.7％,質(zhì)量體積比濃度為30％的丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺凝膠貯液的混合物33.3％，質(zhì)量體積比濃度為10％的SDS水溶液1％，質(zhì)量體積比濃度為10％的過硫酸銨的水溶液1％，N,N,N',N'-四甲基乙二胺0.1％，質(zhì)量體積比濃度為1％的Ⅰ型膠原蛋白水溶液10％，余量為超純水；所述濃縮膠的組成為：pH值為6.8、濃度為0.5mol/L的Tris-HCl緩沖液25％,質(zhì)量體積比濃度為30％的丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺凝膠貯液的混合物16％，質(zhì)量體積比濃度為10％的SDS水溶液1％，質(zhì)量體積比濃度為10％的過硫酸銨的水溶液0.5％，N,N,N',N'-四甲基乙二胺0.1％，余量為超純水。