[發(fā)明專利]一種微量提取辣椒單粒種子DNA的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410277785.7 | 申請日： | 2014-06-20 |
| 公開（公告）號： | CN104017801A | 公開（公告）日： | 2014-09-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王飛;姚明華;李寧;焦春海 | 申請（專利權(quán)）人： | 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟作物研究所 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001 | 代理人： | 王敏鋒 |
| 地址： | 430064 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 微量 提取 辣椒 種子 dna 方法 | ||
1.一種微量提取辣椒單粒種子DNA的方法，其步驟是：
A、隨機抽取辣椒干種子1粒洗凈后，先將種子放入適當容器中，再緩緩倒入50～55℃水，邊倒邊攪拌，使種子受熱均勻，?15-20分鐘后，水溫降至常溫，繼續(xù)浸種4小時；
B、在液氮中磨成粉末，轉(zhuǎn)移至Eppendorf管中；
C、每管再加100μl?DNA提取緩沖液，混勻；
D、置于65℃水浴中保溫10min；
E、加入25μl?3mol/L?NaAc輕輕混勻，冰浴20min，13?000?r/min離心10min；取上清液置于新離心管中，加入預(yù)冷（-20℃）的等體積異丙醇混勻，13?000?r/min離心5min；棄上清，靜置干燥后，用預(yù)冷的75%乙醇清洗后干燥；加入20μl無菌雙蒸水及2μl??3mol/L?NaAc，充分混勻，加入50μl無水乙醇輕輕混勻，置于-70℃深凍1h；13?000?r/min離心5?min，棄上清，用預(yù)冷的75%乙醇清洗后干燥；將核酸溶于5μl無菌雙蒸水，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟A中的辣椒干種子為完整、飽滿的種子，種皮不能粘附任何其他物質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，步驟C?所用的DNA提取緩沖液成份為50mmol/L?Tris/HCl?pH8.0,?10mmol/L?EDTA?pH8.0,?100mol/LNaCl,1.0%?SDS,?8%PVP,??10mmol/L?β-巰基乙醇。
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