[發明專利]綠盲蝽唾液蛋白PG12的應用

在審

• 申請號: 201410277481.0
• 申請日: 2014-06-19
• 公開（公告）號: CN105200025A
• 公開（公告）日: 2015-12-30
• 發明（設計）人: 張帥;崔金杰;王春義;雒珺瑜;呂麗敏;李春花
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院棉花研究所
• 主分類號: C12N9/26
• 分類號: C12N9/26;C12N15/56;C12N15/81;C12N1/19;C12Q1/68;C12Q1/34;C12R1/84
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.綠盲蝽唾液蛋白PG12在降解果膠中的應用，PG12蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.綠盲蝽唾液蛋白PG12在降解植物細胞壁中的應用，PG12蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于，綠盲蝽唾液蛋白PG12的制備方法包括以下步驟：

1)綠盲蝽唾液蛋白PG12基因的克隆：分離綠盲蝽唾液腺，提取總RNA，反轉錄獲得cDNA第一鏈，以cDNA第一鏈為模板，設計引物進行PCR擴增，擴增產物大小為1056bp；回收PCR擴增產物連接到pMD-TEasy載體上，構建重組質粒并轉化大腸桿菌DH5α，提取酶切鑒定正確的陽性克隆的質粒進行測序；

2)重組表達載體的構建：將PCR擴增產物插入pPICZαB載體的EcoRI位點，獲得重組表達載體pPICZαB-PG12-His；

3)酵母轉化及PG12的誘導表達：將pPICZαB-PG12-His轉化入畢赤酵母X-33中，挑取單克隆進行培養，培養過程中加入甲醇誘導表達PG12蛋白，培養結束后，離心收集上清，用帶His標簽蛋白純化柱進行PG12蛋白的純化。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟1)中所述引物為：

F：5′-GAAGCTGCAGGAATTGCCGATATCAATAACCTGGA-3′；

R：5′-CGGCTGGGCCACGTGACAGTCAACTTTGAGCCCGT-3′。

5.綠盲蝽唾液蛋白PG12或其編碼基因在植物抗綠盲蝽唾液腺鑒定技術中的應用。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述植物包括但不限于棉花。