[發明專利]一種快速檢測非結核分枝桿菌的分子信標探針及檢測方法

有效

• 申請號: 201410276800.6
• 申請日: 2014-06-19
• 公開（公告）號: CN104032023A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 洪冉;方華成;劉振世
• 申請（專利權）人: 洪冉
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/32
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 徐關壽

1.一種快速檢測非結核分枝桿菌的分子信標探針，其特征在于，所述分子信標探針的堿基序列為：

Beacon?NTM：5’-CY3-CATTGTACGCCCAGTAATTCCGGACCAATG–BHQ1-3’；

所述探針的5’端用Cy3標記，3’端用BHQ1標記，熒光基團激發波長552nm，檢測波長570nm。

2.如權利要求1所述的分子信標探針，其特征在于，所述分子信標濃度為10ng/μL。

3.一種快速檢測非結核分枝桿菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

(1)裂解液：4％(w/v)氫氧化鈉；

(2)雜交液：10％(w/v)硫酸葡聚糖，10mM?NaCl，20％(v/v)甲酰胺，0.1％(w/v)焦磷酸鈉，0.2％(w/v)聚乙烯基吡咯烷酮，0.2％(w/v)聚鹿糖，5mM?Na2EDTA，0.1％(v/v)TritonX-100，50mM?Tris/HCl(pH7.5)，10ng/μL分子信標探針，所述分子信標探針的堿基序列為：

Beacon?NTM：5’-CY3-CATTGTACGCCCAGTAATTCCGGACCAATG–BHQ1-3’；

(3)終止液：1％(v/v)稀硫酸；

(4)洗滌液：5mM?Tris，15mM?NaCl，0.1％(v/v)Triton?X-100，pH值為10。

4.一種利用權利要求3所述試劑盒快速檢測非結核分枝桿菌的方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)吸取10μL樣品滴在載玻片上，自然風干；

(2)在風干的樣品上加入10μL裂解液，待其自然風干后，浸入無水乙醇中，浸泡5分鐘；

(3)在樣品上加入10μL雜交液，置于雜交爐中52℃雜交10分鐘；

(4)用終止液侵泡1分鐘，終止反應；

(5)滴加封片劑后，用熒光顯微鏡鏡檢，用20×物鏡掃視和計數，用60或100×物鏡觀察細菌形態。