[發明專利]一種固體發酵來源的液體復合酶的制備方法及其用途

有效

• 申請號: 201410275822.0
• 申請日: 2014-06-19
• 公開（公告）號: CN104017790A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 顏鵬飛
• 申請（專利權）人: 顏鵬飛
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N9/40;C12N9/28;A23K1/165;C12R1/885;C12R1/69;C12R1/685;C12R1/07
• 代理公司: 北京東方匯眾知識產權代理事務所(普通合伙) 11296
• 代理人: 白潔

1.一種固體發酵來源的液體復合酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

第一步、固體發酵：將培養基在攪拌機內混合均勻，然后分裝到布袋中，121℃，30min，高壓濕熱滅菌，待培養基冷卻至25-35℃，將培養基倒入攪拌機中然后加入制備好的菌種攪拌均勻，攪拌均勻后放到曲盤中，平鋪均勻，厚度適中，為3-5cm，最后蓋上濕布，開啟控溫開關，控制溫度為29℃，發酵40-60h后，進行翻曲及補水，補水量為8-15％，然后再發酵72小時完成整個發酵過程，得到固體發酵醪；

第二步、液體醪液：在固體發酵醪中添加緩沖液得到液體醪液，緩沖液加入量為固體發酵醪重量的2-3倍；

第三步、過濾：將液體醪液過濾，得到酶液；

第四步、超濾濃縮：通過超濾方式對酶液進行濃縮，濃縮的倍數為2-3倍，得到濃縮酶液；

第五步、酶活檢測、復配：對濃縮酶液的酶活進行測定，然后根據復合酶的配方計算各種單酶的添加量，進行復配，稀釋到規定水平，得到液體酶半成品；

第六步、添加保護劑：在液體酶半成品中添加穩定保護劑，即得液體復合酶。

2.根據權利要求1所述的一種固體發酵來源的液體復合酶的制備方法，其特征在于：所述的菌種為長柄木霉菌粉、米曲霉菌粉、黑曲霉菌粉和解淀粉芽孢桿菌菌粉中的一種或者一種以上的混合物。

3.根據權利要求1所述的一種固體發酵來源的液體復合酶的制備方法，其特征在于：所述的緩沖液為檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，pH為5.0～6.0。

4.根據權利要求1所述的一種固體發酵來源的液體復合酶的制備方法，其特征在于：所述的過濾采取三級過濾，液體醪液依次通過板框過濾、離心過濾和陶瓷膜過濾。

5.根據權利要求1所述的一種固體發酵來源的液體復合酶的制備方法，其特征在于：所述的穩定保護劑為質量分數為60％的乳酸鈉水溶液，添加量為液體酶半成品重量的20-25％。

6.根據權利要求5所述的一種固體發酵來源的液體復合酶的制備方法，其特征在于：所述的添加量為液體酶半成品重量的23％。

7.如權利要求1-6任一項所制備的液體復合酶用于制備飼料的添加劑。