[發明專利]一種豬瘟病毒快速檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201410274790.2
• 申請日: 2014-06-19
• 公開（公告）號: CN104034897A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 李永鋒;陳國勇;傅汝毅;陶玲云;藍文苑
• 申請（專利權）人: 廣西博士海意信息科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 李珊

1.一種豬瘟病毒的快速檢測試劑盒，其特征在于，主要由以下幾種試劑和層析試紙條組成：

試劑A：病毒RNA提取液,由常規現有技術的RNA提取液構成；

試劑B:?包括10×One?step?RNA?PCR?buffer，MgCl2，DNTP?Mixture，RNase?Inhibitor，AMV-Optimized?Taq，AMV?RTase，正向引物，反向引物,所述正向引物，反向引物分別標記了地高辛、熒光素，所述正向引物（F-primer）序列為5’-ACGGAGGGACTAGCCGTAGTG-3’，

反向引物（R-primer）序列為5’-CTGTTAGTGGGCCTCTGCAGC?-3’；

試紙條：由玻璃纖維膜、NC膜、吸水紙和雙面膠塑料板組成，硝酸纖維素膜（NC膜）粘貼在雙面膠塑料板上，玻璃纖維膜和吸水紙分別粘貼在NC膜的兩側并且與NC膜有部分重疊；NC膜上有T點（檢測點）和C點(質控點)，T點位于靠近玻璃纖維膜的一側，玻璃纖維膜上固定有膠體金標記的兔抗地高辛抗體，T點固定的是鼠抗熒光素抗體，C點固定的是羊抗兔多克隆抗體。

2.如權利要求1所述的豬瘟病毒的快速檢測試劑盒，其特征在于：所述的膠體金標記的兔抗地高辛抗體的溶液配制方法為：

（1）取純化好的兔抗地高辛多克隆抗體300?μg，在磁力攪拌下緩慢加入膠體金溶液18?mL，室溫攪拌30?min；

（2）加入10%牛血清白蛋白1?mL，室溫攪拌5?min；

（3）加入10%聚乙二醇0.4?mL，室溫攪拌5?min；

（4）12，000?r/min，離心30?min，去上清，加入2?mL保存液（取四硼酸鈉0.1?g，BSA?0.25?g，溶于250?mL蒸餾水）懸浮沉淀；

（5）加入8?mL稀釋液（取Na2HPO4·12H2O?6.1?g，NaCl?8.5?g，PVP40?5?g，硼酸?2.1?g，PEG?1?g，10%?BSA?50?mL，溶于1000?mL蒸餾水），取小量進行檢定，其余置4℃保存。

3.如權利要求2所述的豬瘟病毒的快速檢測試劑盒，其特征在于，所述膠體金溶液的制備法如下：

a．取1%氯金酸0.6?mL，加30?mL超純水加熱煮沸；

b．加37℃預熱的1%檸檬酸鈉溶液0.9?mL，快速一次加入，溶液由藍逐漸變為紫紅色，煮沸3-5?min，補水至總體積31.5?mL；

c．冷卻后，用0.2?mol/L?K2CO3調pH至8.0-9.0，用0.45?μm濾膜過濾，4℃保存。