[發明專利]人臍帶間充質干細胞復合細胞因子在制備修復皮膚損傷的生物制劑中的應用

有效

• 申請號: 201410273905.6
• 申請日: 2014-06-19
• 公開（公告）號: CN104027794A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 徐妍;郭世磊;周炳榮
• 申請（專利權）人: 徐妍
• 主分類號: A61K38/19
• 分類號: A61K38/19;A61P17/00
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 盧霞

技術領域

????本發明涉及一種人臍帶間充質干細胞復合細胞因子在制備修復皮膚損傷的生物制劑中的應用，屬于醫藥技術領域。

背景技術

人臍帶間充質干細胞是一種來自與人體臍帶組織的間充質細胞，具有高度增殖、自我更新和多向分化能力。間充質干細胞來源廣泛，可來源于骨髓、脂肪、臍血、胎盤、羊水、臍帶等等組織。體外培養應用不同的誘導培養基可分化為軟骨、骨、骨骼肌、肌腱、脂肪、神經、皮膚等等細胞。另外，間充質干細胞具有貼壁生長的特點，方便了條件培養基的收集。

?與其他來源的間充質干細胞相比，臍帶間充質干細胞更方便提取，并且更易獲得。在再生醫學的應用中，臍帶間充質干細胞具有更強的抑制內皮細胞及組織凋亡，調節免疫的作用，而這些作用與其所分泌的復合細胞因子有非常密切的作用。在臍帶間充質干細胞培養過程中會分泌肝細胞生長因子（hepatocyte?growth?factor,?HGF），粒細胞巨噬細胞集落刺激因子，白介素6、7、8、11，腫瘤壞死因子（tumor?necrosis?factor,?TNF），血管內皮生長因子（vascular?endothelial?growth?factor,?VEGF），腦源性營養因子（brain?derived?neurotrophic?factor），神經生長因子（nerve?growth?factor,?NGF），以及其他還沒有被分離的分子物質。所以這種復合細胞因子具有這促進皮膚組織生長，調節損傷后免疫的功能可以用于激光灼傷等理化因素造成的皮膚損傷。

?隨著美容整形市場的擴大，越來越多的人群選擇應用激光祛斑、光子嫩膚等方法進行面部美容。皮膚激光美容術是通過光熱作用進行皮膚治療，通過產生高能量，準確聚焦，在人皮膚組織局部產生高能量，通過去除和破壞組織達到美容的目的。但是因為治療選擇不當、操作不當等原因造成術后并發癥的人群在逐年增多。因操作不當會造成過多的組織損傷，嚴重的炎癥反應，以及毛細血管怒張等等相反的效果。主要的副作用包括水腫、水皰、色素沉著、色素減退、毛細血管擴張、皮膚敏感性增高等等。?

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足之處，提供人臍帶間充質干細胞復合細胞因子在制備修復皮膚損傷的生物制劑中的應用，所述的皮膚損傷包括激光灼傷，也可以是熱灼傷、冷凍傷或普通外傷皮膚物理化學性損傷，所述的復合細胞因子為人臍帶間充質干細胞所分泌的細胞因子，所述的人臍帶間充質干細胞復合細胞因子通過以下步驟制備而得：

1）從人臍帶組織中提取臍帶間充質干細胞；

2）將臍帶間充質干細胞在體外進行擴增培養；

3）臍帶間充質干細胞換用無血清的條件培養基進行培養，并且將培養基進行收集；

4）將條件培養基進行離心純化，截留分子量3.5kDa的物質；

5）將離心后培養基（含>3.5kDa分子）進行透析濃縮，得到濃縮液；

6）將濃縮液進行凍干處理，得到人臍帶間充質干細胞復合細胞因子凍干粉。

更加優選地，

所述的人臍帶間充質干細胞復合細胞因子通過以下步驟制備而得：

1）臍帶間充質干細胞的提取：通過抽脂手術以及其他手術中獲取的人體臍帶組織為原料，通過膠原酶消化后離心提取臍帶間充質干細胞，將臍帶間充質干細胞接種于培養皿中在飽和濕度5%二氧化碳濃度，37°C恒溫下培養。

2）人臍帶間充質干細胞的擴增培養：人臍帶間充質干細胞為長梭形貼壁培養細胞，待細胞生長至80-90%融合時進行傳代培養。

3）人臍帶間充質干細胞條件培養基的收集：培養細胞至第三代，融合率達到80-90%進行細胞因子的收集，應用無血清培養基進行細胞正常培養后，將經過培養的無血清培養基進行收集。

4）人臍帶間充質干細胞條件培養基的離心過濾，濃縮及凍干：將所收集的間充質干細胞條件培養基進行過濾離心，所用離心濾膜為截留分子量為3.5kDa的分子濾膜。將離心后的條件培養基通過超濾的方式進行進一步的濃縮，通過Slide-A-Lyzer等透析膜濃縮2-20倍。將最終的濃縮液放置于容器中進行最終凍干，制備成凍干粉。注意全程無菌化處理。

一種含有人臍帶間充質干細胞復合細胞因子的修復材料，所述的修復材料包括人臍帶間充質干細胞復合細胞因子和透明質酸，每10ml修復材料中含有0.1ng-100mg人臍帶間充質干細胞復合細胞因子。制備方法包括以下步驟：將人臍帶間充質干細胞復合細胞因子濃縮液或凍干粉按照一定比例加入透明質酸中，配置成每10ml修復材料中含有0.1ng-100mg復合細胞因子的修復材料。