[發明專利]與番茄果實顏色性狀相關的分子標記及應用

有效

• 申請號: 201410273647.1
• 申請日: 2014-06-18
• 公開（公告）號: CN104087576B
• 公開（公告）日: 2017-04-19
• 發明（設計）人: 黃三文;祝光濤;林濤;張俊紅;倫堯堯;杜永臣;王孝宣
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司11002
• 代理人: 王文君

1.與番茄果實顏色性狀相關的分子標記，其特征在于，所述分子標記為番茄SlMYB12基因上如Seq ID No.8所示的DNA序列，所述DNA序列第207bp處存在一個SNP位點，此處堿基為C或A，此處堿基為C的對應于紅果番茄，此處堿基為A的對應于粉果番茄；所述SNP位點位于番茄SlMYB12基因起始密碼子上游第8616bp處。

2.與番茄果實顏色性狀相關的分子標記，其特征在于，所述分子標記為InDel標記InDel-p；

所述標記InDel-p是位于番茄SlMYB12基因起始密碼子上游4kb處大小為603bp的DNA序列，該序列缺失的為粉果番茄；所述序列的核苷酸序列如Seq ID No.1所示。

3.用于檢測權利要求1所述分子標記的特異性引物對，其特征在于，所述引物對包括：正向引物F 5’-GCCTTCTTCTACACCCTT-3’和反向引物R 5’-ACACCAGTGCTCCTCCTA-3’。

4.用于檢測權利要求2所述分子標記的特異性引物對，其特征在于，所述引物對包括：正向引物F 5’-AGTGACGAACAACCGACCTA-3’和反向引物R 5’-CCTCACAAACGCGGACAAA-3’。

5.一種鑒定番茄果實顏色的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測番茄的基因組DNA；

2)以待測番茄的基因組DNA為模板，利用權利要求3或4的引物對，進行PCR擴增反應；

3)檢測PCR擴增產物。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟2)中利用權利要求3的引物對進行PCR擴增，PCR反應體系為：含1.5mmol/L Mg²⁺的1×PCR反應緩沖液2μl，2.5mM dNTPs 0.8μl，10μM上、下游引物各0.3μl，2.5U/μl Taq DNA聚合酶0.4μl，20ng/μl DNA模板2μl，ddH₂O補齊至20μl；

PCR擴增程序為：94℃預變性5min；94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35個循環；72℃延伸5min。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟2)中利用權利要求4的引物對進行PCR擴增，PCR反應體系為：含1.5mmol/L Mg²⁺的1×PCR反應緩沖液2μl，2.5mM dNTPs 0.8μl，10μM上、下游引物各0.3μl，2.5U/μl Taq DNA聚合酶0.4μl，20ng/μl DNA模板2μl，ddH₂O補齊至20μl；

PCR擴增程序為：94℃預變性5min；94℃變性20s，55℃退火20s，72℃延伸40s，35個循環；72℃延伸10min。

8.含有權利要求3或4所述引物對的用于檢測番茄果實顏色的試劑盒。

9.權利要求1所述與番茄果實顏色性狀相關的分子標記在番茄分子標記輔助育種中的應用。

10.權利要求2所述與番茄果實顏色性狀相關的分子標記在番茄分子標記輔助育種中的應用。