[發(fā)明專利]一種高產(chǎn)丙酸詹氏丙酸桿菌工程菌及其應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410271329.1 | 申請日： | 2014-06-17 |
| 公開（公告）號： | CN104004700A | 公開（公告）日： | 2014-08-27 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陳堅(jiān);堵國成;劉龍;諸葛鑫 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/74;C12P7/52;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京愛普納杰專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 何自剛;王玉松 |
| 地址： | 214122 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 高產(chǎn) 丙酸 桿菌 工程 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種高產(chǎn)丙酸的詹氏丙酸桿菌工程菌，其特征是，過量表達(dá)來自肺炎克雷伯氏菌的蘋果酸脫氫酶基因mdh。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工程菌，其特征是，同時(shí)還共表達(dá)了來自肺炎克雷伯氏菌的甘油脫氫酶基因gldA。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的工程菌，其特征是，蘋果酸脫氫酶的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的工程菌，其特征是，甘油脫氫酶的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的工程菌，其特征是，以詹氏丙酸桿菌(Propionibacterium?jensenii)JN926?CCTCC?NO:M?2013071為宿主。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的工程菌，其特征是，以質(zhì)粒pZGX04為表達(dá)載體。
7.一種構(gòu)建權(quán)利要求1或2所述工程菌的方法，其特征是，將目的基因片段通過平末端連接克隆入質(zhì)粒pZGX04，構(gòu)建好的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入詹氏丙酸桿菌，經(jīng)篩選驗(yàn)證得到相應(yīng)基因過量表達(dá)的重組菌。
8.一種應(yīng)用權(quán)利要求1或2所述工程菌生產(chǎn)丙酸的方法，其特征是，將在32℃厭氧瓶中靜置培養(yǎng)48h的種子轉(zhuǎn)入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，于32℃、200rpm條件下培養(yǎng)，在60-132h之間以3.33mL/h恒速流加濃度為300g/L的甘油溶液，間歇通氮?dú)狻?/p>
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述種子的培養(yǎng)所用種子培養(yǎng)基組成為：乳酸鈉10g，酵母粉10g，胰蛋白胨大豆肉湯10g，pH7.0，溶于1L水中。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：酵母粉10g，胰蛋白胨大都肉湯5g，K2HPO4?2.5g，KH2PO4?1.5g,甘油30g，CoCl2?8mg，ZnSO4?8mg，MgSO4?8mg，pH7.0，溶于1L水中。
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