[發明專利]一種控制輪蟲攜帶的總細菌數的方法

無效

• 申請號: 201410269825.3
• 申請日: 2014-06-17
• 公開（公告）號: CN104126530A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發明（設計）人: 蔡俊鵬;孫秋平
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00;C02F3/34;A61K35/74;C12N1/20;C12R1/01;A61P31/04
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

1.一種控制輪蟲攜帶的總細菌數的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)制備蛭弧菌稀釋液；

(2)將步驟(1)制備的蛭弧菌稀釋液與保護劑進行混合，即得到蛭弧菌制劑；

(3)含輪蟲的水樣的預處理；

(4)將步驟(2)獲得的蛭弧菌制劑與步驟(3)的含輪蟲的水樣進行混合。

2.根據權利要求1所述的控制輪蟲攜帶的總細菌數的方法，其特征在于：

所述的蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio?sp.)BDS02，為2009年8月7日保藏于中國武漢市武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO：M209170。

3.根據權利要求1所述的控制輪蟲攜帶的總細菌數的方法，其特征在于：

所述的蛭弧菌稀釋液的濃度為2×10³～2×10⁶PFU/mL。

4.根據權利要求1所述的控制輪蟲攜帶的總細菌數的方法，其特征在于：

所述的保護劑為質量體積比5～25％谷氨酸鈉和質量體積比5～25％蔗糖的混合溶液。

5.根據權利要求1所述的控制輪蟲攜帶的總細菌數的方法，其特征在于：

步驟(2)中所述的蛭弧菌稀釋液與保護劑進行混合按照蛭弧菌稀釋液與保護劑進行體積比1：1混合。

6.根據權利要求1所述的控制輪蟲攜帶的總細菌數的方法，其特征在于：

所述的含輪蟲的水樣中的輪蟲數目在20～25個/mL。

7.根據權利要求1所述的控制輪蟲攜帶的總細菌數的方法，其特征在于：

步驟(4)中所述的混合是將蛭弧菌制劑與含輪蟲的水樣按照體積比1:(10～100)混合。

8.根據權利要求1所述的控制輪蟲攜帶的總細菌數的方法，其特征在于：

所述的蛭弧菌稀釋液通過以下步驟獲得：

①宿主菌濃縮液的制備：挑取大腸桿菌單菌落，接種于營養肉湯液體培養基中，培養，得到培養液，然后將培養液離心，棄上清，每100mL培養液收集的沉淀用2～3mL?DNB液體培養基懸浮，得到宿主菌濃縮液，4℃保存備用；

②蛭弧菌稀釋液的制備：按照蛭弧菌：宿主濃縮液：DNB液體培養基的體積比1:1:50的比例進行混合，恒溫培養，每24h添加一次宿主濃縮液，培養48h，得到培養液；將培養液離心，取上清液過濾，濾液使用質量體積比1.5％鹽度的滅菌蒸餾水調整其濃度，制備得到2×10³～2×10⁶PFU/mL的蛭弧菌稀釋液。

9.根據權利要求8所述的控制輪蟲攜帶的總細菌數的方法，其特征在于：

步驟①中所述的營養肉湯液體培養基為營養肉湯18g/L，pH7.2，121℃高壓滅菌15min后保存備用；

步驟①中所述的培養的條件為200rpm、28℃培養18h；

步驟①中所述的離心的條件為4℃、6000rpm離心20min；

步驟②中所述的恒溫培養的條件為230rpm、28℃培養；

步驟②中所述的將培養液離心的條件為6000rpm、4℃離心20min；

步驟②中所述的過濾為用0.45μm醋酸纖維素膜進行過濾；

步驟②中所述的質量體積比1.5％鹽度的滅菌蒸餾水用海水晶制備得到。

10.根據權利要求8所述的控制輪蟲攜帶的總細菌數的方法，其特征在于：

步驟①和②中所述的DNB液體培養基，通過如下步驟制備：稱取0.8g/L的營養肉湯，0.5g/L的酪蛋白酸水解物和0.1g/L的酵母提取物，15g/L海水晶，用蒸餾水溶解混勻，調pH值至7.2～7.6，121℃0.1MPa條件下處理20min保存備用。