[發(fā)明專利]檢測轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C的方法及引物對

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410267596.1
• 申請日: 2014-06-16
• 公開（公告）號: CN104032014A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發(fā)明（設計）人: 韓庚辰;宋哲;姜付坤;張華
• 申請（專利權）人: 北京奧瑞金種業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，涉及一種用于檢測轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C的方法及引物對。

背景技術

雜草是農作物生產的大害，自1942年出現(xiàn)近代雜草防治技術以來，化學除草劑有了很大的發(fā)展。草甘膦類除草劑是一種廣譜性、非選擇性除草劑，它通過抑制EPSPS(5-烯醇丙酮酰草酸-3-磷酸合酶，是植物體內芳香族氨基酸合成途徑中的一個重要酶)的活性，阻斷了植物莽草酸途徑的生物合成，強烈抑制細胞分裂，對許多一年生和多年生雜草都具有強烈的抑制作用。由于草甘膦易于被微生物分解，在土壤中無殘毒，對動物無毒害，自從1976年Roundup研制成功以來，得到了廣泛的應用。

但是，由于玉米等禾本科作物對草甘膦敏感，使其應用受到限制。因此，將耐草甘膦基因轉入玉米，不但可以擴大草甘膦的使用范圍，而且可降低生產成本，保護玉米免受藥害，最終達到增產增收的目的。盡管耐草甘膦基因G2-aroA已在2004年被發(fā)現(xiàn)，并在宿主熒光假單胞菌G2及大腸桿菌中都能高效表達，表現(xiàn)高耐草甘膦的特性(Yichen?Sun,Min?Lin?and?Yiping?Wang.Novel?AroA?with?high?tolerance?to?Glyposate,encoded?by?a?gene?of?Pseudomonas?putida4G-1isolated?from?an?extremelypolluted?environment?in?China.Aplied?and?environmental?microbiology.2005,71(8):4771-4776)，但其在植物，特別是重要的糧食作物中由于表達量較低而沒有被利用，因此急需對其在植物中的應用進行研究，如進行密碼子優(yōu)化，以加速其應用到農業(yè)生產中。

本發(fā)明的發(fā)明人所在團隊在前期工作中，將耐草甘膦基因G2-aroA經過密碼子優(yōu)化后轉入玉米中，獲得轉基因玉米，并經實驗證實與密碼子優(yōu)化前相比，密碼子優(yōu)化后的轉基因玉米整體表現(xiàn)出G2-aroA蛋白的表達量明顯提高，且對草甘膦的耐受性也明顯提高(中國專利，申請?zhí)?01210107071.2，授權公告號CN102676553B)。

發(fā)明內容

本發(fā)明的一個目的是提供用于檢測或輔助檢測待測玉米是否為轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C的引物對組。

在本發(fā)明中，所述轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C具體為保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)的保藏編號為CGMCC?No.9154的玉米株系。

本發(fā)明所提供的用于檢測或輔助檢測待測玉米是否為轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C的引物對組，由引物對1和引物對2組成；

所述引物對1由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成；所述引物對2由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA分子組成。

在本發(fā)明中，所述引物對1和所述引物對2單獨包裝，每個引物對中兩個單鏈DNA分子既可以單獨包裝也可以等摩爾混合包裝。

其中，所述序列1由26個核苷酸組成；序列2由26個核苷酸組成；序列3由26個核苷酸組成；序列4由26個核苷酸組成。

所述引物對組在制備用于檢測或輔助檢測待測玉米是否為轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C的試劑盒中的應用也屬于本發(fā)明的保護范圍。

本發(fā)明再一個目的是提供一種用于檢測或輔助檢測待測玉米是否為轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C的試劑盒。

本發(fā)明所提供的用于檢測或輔助檢測待測玉米是否為轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C的試劑盒，具體可包含有如上所述的引物對組。

所述試劑盒還可含有由序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈DNA分子組成的內參引物對(針對玉米中內參基因ADH設計的引物對)。

所述試劑盒中還可含有PCR反應所需的常規(guī)試劑，如DNA聚合酶、dNTP等。

所述試劑盒的制備方法也屬于本發(fā)明的保護范圍。

所述試劑盒的制備方法，為如下(a1)或(a2)：

(a1)包括如下步驟：將所述引物對組中每個引物對的兩條單鏈DNA分子分別單獨包裝；

(a2)包括如下步驟：將所述引物對組中每個引物對的兩條單鏈DNA分子，以及所述內參引物對的兩條單鏈DNA分子分別單獨包裝。