[發明專利]檢測轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C的方法及引物對有效
| 申請號： | 201410267596.1 | 申請日： | 2014-06-16 |
| 公開（公告）號： | CN104032014A | 公開（公告）日： | 2014-09-10 |
| 發明（設計）人： | 韓庚辰;宋哲;姜付坤;張華 | 申請（專利權）人： | 北京奧瑞金種業股份有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢 |
| 地址： | 102206 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 檢測 g2 aroa 基因 除草劑 玉米 g1105e 823 方法 引物 | ||
1.用于檢測或輔助檢測待測玉米是否為轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C的引物對組，由引物對1和引物對2組成；
所述引物對1由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成；所述引物對2由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA分子組成。
2.權利要求1所述的引物對組在制備用于檢測或輔助檢測待測玉米是否為轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C的試劑盒中的應用。
3.用于檢測或輔助檢測待測玉米是否為轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C的試劑盒，包含有權利要求1所述的引物對組。
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還含有由序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈DNA分子組成的內參引物對。
5.權利要求3或4所述試劑盒的制備方法，為如下(a1)或(a2)：
(a1)包括如下步驟：將所述引物對組中每個引物對的兩條單鏈DNA分子分別單獨包裝；
(a2)包括如下步驟：將所述引物對組中每個引物對的兩條單鏈DNA分子，以及所述內參引物對的兩條單鏈DNA分子分別單獨包裝。
6.權利要求1所述引物對組，或權利要求3或4所述試劑盒在檢測或輔助檢測待測玉米是否為轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C中的應用。
7.檢測或輔助檢測待測玉米是否為轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C的方法，包括如下步驟：
(1)以所述待測玉米的基因組DNA為模板，采用權利要求1所述引物對組中的兩個引物對分別進行PCR擴增，獲得PCR產物；
(2)根據所述PCR產物的大小，按照如下方法確定所述待測玉米是否為轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C：若所述PCR產物中是否同時含有大小為256bp和820bp的兩個DNA片段，則所述待測玉米為或候選為轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C；若所述PCR產物中同時不含有大小為256bp和820bp的兩個DNA片段，則所述待測玉米不為或候選不為轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述大小為256bp的DNA片段為序列表中序列5所示DNA片段；所述大小為820bp的DNA片段為序列表中序列6所示DNA片段。
9.根據權利要求7或8所述的方法，其特征在于：以權利要求1所述引物對組中的所述引物對1進行PCR擴增的退火溫度為62℃；以權利要求1所述引物對組中所述引物對2進行PCR擴增的退火溫度為62℃。
10.轉G2-aroA基因耐除草劑玉米G1105E-823C外源插入片段的側翼序列，由5’側翼序列和3’側翼序列組成，其特征在于：所述5’側翼序列的核苷酸序列為序列表中序列5；所述3’側翼序列為序列表中序列6。
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