[發(fā)明專利]快速篩選香蕉抗病相關(guān)基因的細(xì)胞模型

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410267550.X
• 申請(qǐng)日: 2014-06-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104004703A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃霞;蔡穎欣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/04
• 分類號(hào): C12N5/04;C12N5/02;C12Q1/68
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

1.一種快速篩選香蕉抗病相關(guān)基因的細(xì)胞模型，其特征在于：該細(xì)胞模型的制備方法包括如下步驟：

(1)病原菌培養(yǎng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生病原菌毒素，將病原菌毒素分離提取，得到病原菌粗毒素，貯存?zhèn)溆茫?/p>

(2)將步驟(1)中得到的病原菌粗毒素分別加入香蕉抗病和感病品種的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，誘發(fā)香蕉細(xì)胞抗病反應(yīng)，并分別收集香蕉細(xì)胞，即得到快速篩選香蕉抗病相關(guān)基因的細(xì)胞模型。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速篩選香蕉抗病相關(guān)基因的細(xì)胞模型，其特征在于：步驟(1)所述的病原菌包括導(dǎo)致香蕉病害的真菌、細(xì)菌或病毒。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速篩選香蕉抗病相關(guān)基因的細(xì)胞模型，其特征在于：步驟(1)中所述的誘導(dǎo)的條件為每40～60mL馬鈴薯液體培養(yǎng)基中接種一塊病原菌菌絲體，于24～26℃持續(xù)光照條件下，120～150rpm振蕩培養(yǎng)10～14天；

所述的病原菌菌絲體為病原菌于馬鈴薯固體培養(yǎng)基上，24～26℃光照培養(yǎng)6～8天，切取面積1～1.5cm²的菌絲體。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速篩選香蕉抗病相關(guān)基因的細(xì)胞模型，其特征在于：步驟(2)中所述的病原菌粗毒素，與懸浮細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)按體積比1:19.5的比例混合。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速篩選香蕉抗病相關(guān)基因的細(xì)胞模型，其特征在于：

步驟(2)中所述的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)由香蕉懸浮細(xì)胞的細(xì)胞沉淀和香蕉細(xì)胞懸浮培養(yǎng)基按體積比0.5:19比例混合。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的快速篩選香蕉抗病相關(guān)基因的細(xì)胞模型，其特征在于：所述的香蕉懸浮細(xì)胞的細(xì)胞沉淀通過(guò)如下步驟制備：分別取在香蕉細(xì)胞懸浮培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)3～5天的大蕉和巴西蕉懸浮細(xì)胞，4000～5000rpm離心8～10分鐘，去上清，即得細(xì)胞沉淀。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速篩選香蕉抗病相關(guān)基因的細(xì)胞模型，其特征在于：步驟(2)中所述的誘發(fā)香蕉細(xì)胞抗病反應(yīng)的條件為26±1℃，90～110rpm黑暗振蕩培養(yǎng)；

步驟(2)中所述的收集香蕉細(xì)胞的時(shí)間為0、12、24、36、48h。

8.權(quán)利要求1～7任一項(xiàng)所述的快速篩選香蕉抗病相關(guān)基因的細(xì)胞模型在快速篩選香蕉抗病相關(guān)基因中的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于：包括如下步驟：

取權(quán)利要求1～7任一項(xiàng)所述的細(xì)胞模型，分別抽提RNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析，比較目的基因在香蕉抗病和感病品種的細(xì)胞中的表達(dá)模式；如果該目的基因的激活表達(dá)在抗病品種的細(xì)胞中比感病品種的細(xì)胞中更強(qiáng)、更快或持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，則說(shuō)明該目的基因是香蕉抗病反應(yīng)的正調(diào)控基因；如果該目的基因的表達(dá)抑制在抗病品種的細(xì)胞中比感病品種的細(xì)胞中更強(qiáng)烈，則說(shuō)明該目的基因是香蕉抗病反應(yīng)的負(fù)調(diào)控基因。