[發明專利]一種檢測發酵乳中乳酸菌數的方法

有效

• 申請號: 201410267349.1
• 申請日: 2014-06-16
• 公開（公告）號: CN104031976A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 富鑫;儲小軍;華家才;來燕
• 申請（專利權）人: 貝因美嬰童食品股份有限公司;杭州貝因美母嬰營養品有限公司;黑龍江貝因美乳業有限公司
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵;馮瓊

技術領域

本發明涉及分析化學領域，更具體的說是涉及一種檢測發酵乳中乳酸菌數的方法。

背景技術

發酵乳在GB19302-2010中的定義為“以生牛(羊)乳或乳粉為原料，經殺菌、發酵后制成的pH值降低的產品”，涵蓋了發酵乳、酸乳、風味發酵乳、風味酸乳等產品。由于食用時發酵乳及發酵乳飲料中的活菌數需達到一定數量才能起到保健作用，因此GB19302-2010中明確規定了發酵乳產品的乳酸菌限量：乳酸菌數≥1×10⁶cfu/g(ml)。

乳酸菌總數為發酵乳產品出廠檢測的關鍵檢測項目，目前行業內對發酵乳乳酸菌總數的檢測手段為GB4789.35方法，該方法不但需要專業人員操作，運行成本較高，而最為重要的是該方法的檢驗周期為48小時，由于發酵乳為全冷鏈運輸，且其銷售保質期很短(15天)，漫長的出廠檢驗嚴重縮短了發酵乳產品原本就很短的貨架期，嚴重了影響企業的利潤。

為了縮短檢測時間，現有技術報道基于刃天青還原法，采用醫療衛生領域的RGB顏色信息采集儀器，記錄檢測樣品顏色變化，而檢測樣品顏色變化和細菌總數相關，從而獲得細菌總數。但是，由于發酵乳產品的pH過低(市售的合格發酵乳pH值在4.0～4.5范圍)，不符合刃天青染料還原法的反應條件。相關研究結果證明，應用刃天青染料還原法檢測乳酸菌總數，pH值在6.5～7.0范圍內檢測結果無顯著差異。因此需要將發酵乳樣品經處理后使其pH值在6.5～7.0范圍內，方可應用刃天青染料還原法對其乳酸菌總數進行檢測。

常規的pH值調節方法為對樣品添加pH值較高的緩沖液調節至所需pH值范圍，這一方法雖然用量較少，但由于發酵乳產品的pH值并不是固定值，因此應用緩沖液調節至同一pH值會使樣品的稀釋程度不同，從而導致檢測結果不準確。

如果加入中性純水或去離子水稀釋，可以使樣品pH值達到6.5-7.0范圍內，但需要對發酵乳樣品進行100倍以上的稀釋，因而大大的降低了檢測精度，更為重要的是，根據RGB顏色信息采集的原理，其為通過LED燈光對樣品的反射來采集顏色變化信息，如果將樣品稀釋近100倍，樣品稀釋液已經幾乎完全透明，因樣品對光的反射大大降低，無法準確采集顏色變化信息，無法進行準確的檢測。

發明內容

有鑒于此，本發明提供一種檢測發酵乳中乳酸菌數的方法，使得所述方法能夠快速、準確的檢測出發酵乳中的乳酸菌數。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種檢測發酵乳中乳酸菌數的方法，包括如下步驟：

步驟1、將發酵乳標準品用UHT乳稀釋5-20倍，然后向稀釋后的發酵乳標準品中加入刃天青反應，用RGB顏色信息采集儀器記錄發酵乳標準品終點R值與起始R值的R差值，并建立R差值X與乳酸菌菌落總數Y之間的標準方程；

其中，所述終點R值為第1-15分鐘內任意時間點的R值，所述起點R值為0分鐘的R值；

步驟2、將步驟1中發酵乳標準品替換為發酵乳待測樣品，在相同的檢測環境下，記錄發酵乳待測樣品的R差值并代入步驟1中獲得的標準方程中，檢測出發酵乳待測樣品中的乳酸菌數。

乳酸菌在代謝過程中，由于生理需要產生氧化還原酶，該酶和與刃天青反應使其由藍色變為粉色，而氧化還原酶的多少和乳酸菌數多少直接相關，進而通過儀器記錄反應的顏色變化(R值變化)，建立起和乳酸菌數相關的公式。

本發明所述UHT(Ultra?High?Temperature?treated)乳為超高溫滅菌乳。超高溫瞬時滅菌，135-140℃，4-10秒，是鮮奶處理的一種滅菌工藝。本發明采用UHT乳對樣品進行稀釋，第一，其不會帶入細菌影響檢測結果；第二，其不會改變溶液的透明度，處理的樣品依然為不透明的乳白色液體；第三，UHT乳為負電性膠體溶液，負電性膠粒將吸附氫離子，因此在稀釋用量相同的前提下，UHT乳稀釋的樣品pH值更高，因此使用UHT乳調節樣品pH值至6.5-7.0用量較純水更少。

本發明分別采用UHT乳稀釋發酵乳8倍、10倍和15倍，稀釋后的發酵乳pH值均處于6.5-6.9范圍內。

在本發明技術方案中，優選地，所述發酵乳標準品個數為5個以上。

優選地，所述刃天青濃度為0.0005-0.05g/mL。

優選地，所述稀釋后的發酵乳標準品和刃天青的體積比為9:1。

優選地，所述稀釋倍數為8-15倍，更優選地，所述稀釋倍數為10倍。

優選地，所述終點R值為第5分鐘的R值。