[發明專利]一種利用高效逆流色譜純化蜂窩草酮的方法

在審

• 申請號: 201410266486.3
• 申請日: 2014-06-16
• 公開（公告）號: CN104069168A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發明（設計）人: 劉東鋒;楊成東
• 申請（專利權）人: 南京澤朗醫藥科技有限公司
• 主分類號: A61K36/53
• 分類號: A61K36/53;A61P1/00;A61P31/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于天然產物分離領域，涉及一種利用高效逆流色譜純化蜂窩草酮的方法。

背景技術

蜂窩草又名打毒金，來源于唇形科繡球防風屬植物蜂窩草的全草。蜂窩草氣味微苦，口感辛辣，藥性溫和。

蜂窩草是常用的中草藥，廣州部隊《常用中草藥手冊》中描述：“驅風解表，止咳化痰，治感冒，咳嗽，風火牙痛，腸胃不適，百日咳”；《文山中草藥》中描述：“解表止咳，明目通經；治感冒，頭痛，身窟，支氣管哮喘，閉經，消化不良，夜盲癥”；《廣西藥植名錄》中描述：“治疥癬，皮膚病”。

蜂窩草酮具有抑制大腸桿菌和腸炎沙門菌活性的作用，對治療腸胃不適具有獨特的療效。

目前，尚未見采用高效逆流色譜分離純化蜂窩草總黃酮的報道，也未見有相關專利。本發明通過高效逆流色譜分離純化蜂窩草總黃酮，所得產品質量好、純度高，該方法工藝簡單、適合中小規模生產。

發明內容

本發明的目的在于提供一種利用高效逆流色譜純化蜂窩草酮的方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種利用高效逆流色譜純化蜂窩草酮的方法，其特征在于以下步驟：

a.取蜂窩草干燥品粉碎過40目篩，加8-10倍量乙醇超聲提取，加入活性炭脫色，過濾；

b.濾液超濾除雜，納濾濃縮，放置析出結晶；

c.將上述結晶物以乙酸乙酯-乙醇-水為溶劑系統，用高效逆流色譜分離，根據HPLC-ELSD檢測圖收集目標流分。

所述步驟a中，乙醇濃度70%-90%，活性炭量為溶液量的0.5%-3%，超聲頻率為40-65KHz，超聲時間為20-60min，提取2-3次。

所述步驟b中，超濾膜為1000-3000D的中空纖維式聚砜膜，進口壓力為0.1-0.31MPa，納濾膜為200-300D的中空纖維式聚砜膜，進口壓力為1.0-2.2MPa。

所述步驟c中，乙酸乙酯-乙醇-水的比例為2-4：5-7：3-5，上相為流動相，下相為固定相。

所述步驟c中，將固定相充滿逆流色譜柱，調整主機轉速800-1000rpm，再將流動相泵入色譜柱，平衡后調整流速1-3ml/min，同時取流動相溶解粗結晶物，進樣閥進樣。

本發明是采用高速逆流色譜技術對中藥粗提物進行分離純化，簡便、快速，同時避免了樣品損失。克服了傳統制備方法操作繁瑣、分離周期長等缺點，并有制備量大、分離效率高、產品純度好等優點。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限于此。

實施例1：

取干燥的蜂窩草1kg，粉碎，過40目篩，加入8kg80%的乙醇超聲提取30min，提取2次，超聲頻率為40KHZ，加入溶液量1%活性炭脫色，過濾。濾液先后經經1000D中空纖維式聚砜膜超濾除雜，進口壓力為0.1MPa，200D中空纖維式聚砜膜納濾濃縮，進口壓力為1.0MPa，放置結晶。

將乙酸乙酯-乙醇-水按2：5：3體積比混合，超聲搖勻，靜置分層后分離，下相為固體相，上相為流動相，結晶用上相溶解，將固定相泵滿色譜柱，然后調整主機轉速為800rmp，再以3ml/min流速泵入流動相，待柱內溶劑系統建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器譜圖接收目標流分，蒸干即得蜂窩草酮產品11.8g，含量94.5%。

實施例2：

取干燥的蜂窩草3kg，粉碎，過40目篩，加入30kg80%的乙醇超聲提取60min，提取3次，超聲頻率為65KHZ，加入溶液量3%活性炭脫色，過濾。濾液先后經經3000D中空纖維式聚砜膜超濾除雜，進口壓力為0.2MPa，200D中空纖維式聚砜膜納濾濃縮，進口壓力為2.0MPa，放置結晶。

將乙酸乙酯-乙醇-水按4：7：5體積比混合，超聲搖勻，靜置分層后分離，下相為固體相，上相為流動相，結晶用上相溶解，將固定相泵滿色譜柱，然后調整主機轉速為100rmp，再以2ml/min流速泵入流動相，待柱內溶劑系統建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器譜圖接收目標流分，蒸干即得蜂窩草酮產品35.2g，含量96.3%。