[發(fā)明專利]一種扣匹素的制備方法及抗腫瘤應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410266375.2
• 申請(qǐng)日: 2014-06-16
• 公開（公告）號(hào): CN104072451A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉東鋒;楊成東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C07D307/58
• 分類號(hào): C07D307/58;A61K31/365;A61P35/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明公開了一種植物提取物的制備方法及應(yīng)用，特別涉及一種扣匹素的制備方法及抗腫瘤應(yīng)用。

背景技術(shù)

扣匹素（Tonkinin）為乙酰精寧類化合物，CAS號(hào)188295-46-7，分子式C₃₇H₇₀O₄，分子量578.96，分子結(jié)構(gòu)式為：

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扣匹素來源于番荔枝科(Annonaceae)?扣匹?Uvaria?tonkinensis?Finet?et?Gagnep.的根，具有抗腫瘤促進(jìn)作用，對(duì)人型白血病HL-60細(xì)胞株和人型結(jié)腸腺癌HCT-8細(xì)胞株的IC50分別為1μM和6.7μM。

目前，番荔枝科植物次生代謝物番荔枝乙酰精寧類化合物被視為新的抗腫瘤藥物的潛在資源，是抗腫瘤藥物的候選藥物。

目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)扣匹素的應(yīng)用文獻(xiàn)極少，因扣匹素在植物中的含量較低且提取困難，因此對(duì)扣匹素研究帶來了較大的局限，因此提取制備扣匹素的研究就成為一個(gè)亟待解決的問題。經(jīng)檢索，尚無(wú)扣匹素的工業(yè)生產(chǎn)方法的專利文獻(xiàn)報(bào)道。通過文獻(xiàn)檢索，現(xiàn)有乙酰精寧類活性物質(zhì)的提取大都是采用硅膠、凝膠色譜法進(jìn)行分乙醇提回流提取，硅膠、凝膠色譜法進(jìn)行分離等步驟。由于操作復(fù)雜，制備量較小，樣品得率低，不適合扣匹素的工業(yè)化制備。

發(fā)明內(nèi)容

為滿足臨床需要，擴(kuò)大用藥品種，更好地治療癌癥，，提供一種扣匹素的制備方法及抗腫瘤應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種扣匹素的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）取扣匹的根，經(jīng)粉碎處理，置于萃取釜中，以乙醇作為夾帶劑，進(jìn)行超臨界CO₂萃取，解析，收集扣匹的根萃取物；

（2）萃取物與聚酰胺樹脂按重量比1:1-2.5充分混勻，裝入層析柱，然后用30-90%乙醇洗脫，流速為0.8-2BV/h，收集洗脫液，濃縮，得粗品；

（3）采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的扣匹素，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集扣匹素組分；

（4）將扣匹素組分進(jìn)行真空濃縮，析出結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得扣匹素。

所述步驟（1）中超臨界萃取溫度為45-55℃，萃取壓力為30-43MPa，解析溫度為25-42℃，解析壓力為6-10MPa，CO₂流量為15-20L/h。

所述步驟（3）中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統(tǒng)的體積比為5-8:3-5:4-6:2-3，取上相做固定相，下相為流動(dòng)相，主機(jī)轉(zhuǎn)速700-1000rpm，流速為1-3mL/min。

所述制備的扣匹素，在其口服配方中添加腸吸收促進(jìn)劑，包含中鏈脂肪酸鹽、膽酸鹽、鵝去氧膽酸鹽、殼聚糖及其衍生物中的一種或幾種。

（1）采用超臨界提取技術(shù)對(duì)環(huán)境無(wú)污染；（2）通過聚酰胺樹脂對(duì)乙酰精寧類化合物的吸附和洗脫，操作簡(jiǎn)單、分離效果好；（3）采用高速逆流色譜制備工藝，較制備液相色譜制備工藝而言，克服了樣品吸附、損失和峰形拖尾等缺點(diǎn)，且具有制備量大、易于工業(yè)推廣等優(yōu)點(diǎn)；（4）添加腸吸收促進(jìn)劑，有利于提高生物利用度。

下面將結(jié)合具體實(shí)施方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

扣匹素的制備

取扣匹的根，經(jīng)粉碎處理，稱取1kg，置于萃取釜中，以乙醇作為夾帶劑，通入超臨界CO₂流體，CO₂流量為18L/h，超臨界萃取溫度為48℃，萃取壓力為32MPa，解析溫度為29℃，解析壓力為7MPa，進(jìn)行超臨界CO₂萃取1h，解析，收集萃取物，與聚酰胺樹脂按重量比1:1.5充分混勻，裝入層析柱，依次用去離子水、30%乙醇溶液和90%乙醇溶液洗脫，流速為0.8BV/h，收集高濃度乙醇洗脫液，減壓濃縮，得粗品；采用高速逆流色譜法分離純化粗品中的扣匹素，以體積比5:4:6:2石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，主機(jī)轉(zhuǎn)速1000rpm，泵入下相做流動(dòng)相，流速為3mL/min，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集扣匹素組分，進(jìn)行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得扣匹素，含量97.6%。

實(shí)施例2：