[發明專利]一種脂蛋白相關磷脂酶A2酶聯免疫檢測試劑盒及制備方法

在審

• 申請號: 201410265732.3
• 申請日: 2014-06-13
• 公開（公告）號: CN104007260A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 蘭成杰
• 申請（專利權）人: 天津康爾克生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/535
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產權代理有限公司 12211
• 代理人: 楊慧玲

技術領域

本發明屬于免疫檢測分析技術領域，尤其涉及一種脂蛋白相關磷脂酶A2酶聯免疫檢測試劑盒及制備方法。

背景技術

動脈粥樣硬化(atherosclerosis)是嚴重危害人類健康的常見病種，在過去很長一段時間內始終是醫學和生物化學研究的重點。因為它普及面廣，在人體內潛伏期長，往往以局部缺血、心絞痛、心肌梗塞、中風、冠心病或心力衰竭等致命病的形式爆發，已成為現階段最常見的死因。

脂蛋白相關磷脂酶A2(Lp-PLA2)是心血管疾病中一種新的炎癥酶，屬于磷脂酶家族中PLA2的一種，是絲氨酸依賴的磷脂酶，能水解氧化低密度脂蛋白(LDL)，產生溶血磷脂酰膽堿(lysophosphatidylcholine，Lyso-PC)和氧化型游離脂肪酸(oxidized?free?fatty?acids，ox-FA)，促進動脈粥樣硬化的形成和發展。越來越多的研究證實，Lp-PLA2活性能反映動脈粥樣硬化病變的嚴重程度，并與易損斑塊的穩定性有關。它可作為缺血性卒中獨立的預測因子，可提供傳統危險因子評估以外的預測信息，測定其水平有助于指導預防策略。Lp-PLA2與其他炎性因子(如C-反應蛋白等)相比，受其他危險因素的影響較小，檢測具有更高的靈敏度和特異性，目前已被用作預測心血管事件的風險指標，用以對患者心血管疾病進行早期診斷、療效觀察及預后評估。大量臨床研究證實，Lp-PLA2與其他心血管疾病標志物聯檢，可以更進一步提高診斷的敏感性和特異性。

目前，臨床上用于測定Lp-PLA2的方法有ELISA法和免疫比濁法兩種。免疫比濁法檢測靈敏度低，很容易受血脂濃度影響產生假性升高，且不適用于大批量、自動化式檢測平臺。ELISA法具有更高的靈敏度、特異性，且具有檢測時間短、測量線性范圍寬、穩定性好、操作簡便快捷、便于自動化、安全無污染等諸多優點，已廣泛應用于傳染病、肥胖相關疾病、內分泌系統、遺傳病、腫瘤的早期診斷、動植物檢驗檢疫等眾多領域，并已逐漸成為標記免疫分析的一個重要方向。

發明內容

本發明實施例的目的在于提供一種簡便、快捷、準確的脂蛋白相關磷脂酶A2酶聯免疫檢測試劑盒及制備方法，旨在解決酶聯免疫分析技術在人Lp-PLA2免疫分析產品的應用方面仍是空白的問題。

本發明實施例是這樣實現的，一種脂蛋白相關磷脂酶A2酶聯免疫檢測試劑盒，該脂蛋白相關磷脂酶A2酶聯免疫檢測試劑盒包括：標準品和質控品、包被載體、酶標記物、顯色液、分析緩沖液及濃縮洗滌液；

標準品和質控品是以胎牛血清為基質，由脂蛋白相關磷脂酶A2抗原稀釋而成，其中標準品的濃度包括1000ng/mL、500ng/mL、250ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、0ng/mL共6個濃度，質控品分為質控低值和質控高值，濃度范圍依次為150±30ng/mL、300±60ng/mL。

進一步載體為微孔板、磁性顆粒或塑料管。

進一步用于標記的酶為堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶。

進一步顯色液為四甲基聯苯胺或3-(2’-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3’-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷。

進一步分析緩沖液為含有1％牛血清白蛋白和0.05％吐溫的10mM磷酸鹽緩沖溶液，pH7.2-7.4。

進一步濃縮洗滌液為含有1％吐溫的20mM磷酸鹽緩沖溶液，pH7.2-7.4。

本發明實施例的另一目的在于提供一種脂蛋白相關磷脂酶A2酶聯免疫檢測試劑盒制備方法，該脂蛋白相關磷脂酶A2酶聯免疫檢測試劑盒制備方法包括以下步驟：

步驟一，制備脂蛋白相關磷脂酶A2標準品和質控品：

用pH7.4、20mmol/L?PBS緩沖液與胎牛血清按體積比3:1比例混合配制成基礎緩沖液，用基礎緩沖液將脂蛋白相關磷脂酶A2重組抗原稀釋成濃度為1000、500、250、100、50、0ng/mL標準品；用基礎緩沖液將脂蛋白相關磷脂酶A2重組抗原稀釋成濃度為300ng/mL高值質控品和150ng/mL低值質控品，高、低質控品的濃度測定范圍經統計學分析確定為300±35ng/mL、150±15ng/mL；

步驟二，制備包被有脂蛋白相關磷脂酶A2抗體的載體：