[發(fā)明專利]一種脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2酶聯(lián)免疫檢測試劑盒及制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201410265732.3
• 申請日: 2014-06-13
• 公開（公告）號: CN104007260A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蘭成杰
• 申請（專利權(quán)）人: 天津康爾克生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/535
• 代理公司: 天津?yàn)I海科緯知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12211
• 代理人: 楊慧玲

1.一種脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2酶聯(lián)免疫檢測試劑盒包括：標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品、包被載體、酶標(biāo)記物、顯色液、分析緩沖液及濃縮洗滌液；

標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品是以胎牛血清為基質(zhì)，由脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗原稀釋而成，其中標(biāo)準(zhǔn)品的濃度包括1000ng/mL、500ng/mL、250ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、0ng/mL共6個(gè)濃度，質(zhì)控品分為質(zhì)控低值和質(zhì)控高值，濃度范圍依次為150±30ng/mL、300±60ng/mL。

2.如權(quán)利要求1所述的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述包被載體為微孔板、磁性顆粒或塑料管。

3.如權(quán)利要求1所述的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)記物為堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶。

4.如權(quán)利要求1所述的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述顯色液為四甲基苯胺或3-(2’-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3’-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷。

5.如權(quán)利要求1所述的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述分析緩沖液為含有1％牛血清白蛋白和0.05％吐溫的10mM磷酸鹽緩沖溶液，pH為7.2-7.4。

6.如權(quán)利要求1所述的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述濃縮洗滌液為含有1％吐溫的20mM磷酸鹽緩沖溶液，pH為7.2-7.4。

7.一種脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2酶聯(lián)免疫檢測試劑盒制備方法，其特征在于，所述脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2酶聯(lián)免疫檢測試劑盒制備方法包括以下步驟：

步驟一，制備脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品：

用pH＝7.4，20mmol/L的PBS緩沖液與胎牛血清按體積比3:1比例混合配制成基礎(chǔ)緩沖液，用基礎(chǔ)緩沖液將脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗原稀釋成濃度為1000、500、250、100、50、0ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品；用基礎(chǔ)緩沖液將脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗原稀釋成濃度為300±60ng/mL的高值質(zhì)控品和150±30ng/mL的低值質(zhì)控品；

步驟二，制備包被有脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體的載體：

所述包被載體為微孔板或塑料管時(shí)，包被載體通過以下方法制備：脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體用包被緩沖液稀釋，取待包被載體，將經(jīng)過稀釋的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體負(fù)載于載體上，包被結(jié)束后，吸去包被緩沖液，再加入封閉緩沖液，置于37℃封閉2小時(shí)或4℃封閉過夜；棄去封閉液，室溫18-25℃干燥3-4小時(shí)后加入干燥劑密封包裝，得到脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體包被載體，所述包被緩沖液為pH為7.2-7.4、10mmol/L磷酸鹽溶液，脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體的稀釋濃度為1ug/mL；稀釋的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體在載體上的包被量可為每孔100ul；包被的條件可置于37℃包被2小時(shí)或4℃包被過夜；封閉緩沖液為pH7.2-7.4、10mmol/L?PBST溶液，內(nèi)含1％BSA及1～10％蔗糖；封閉緩沖液的加入量可為每孔300ul；封閉后包被載體的干燥環(huán)境相對濕度小于30％；

步驟三，制備脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體酶標(biāo)記物：

用于標(biāo)記的酶為堿性磷酸酶時(shí)，酶標(biāo)記抗體的制備方法為：采用戊二醛交聯(lián)法將脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體與堿性磷酸酶偶聯(lián)，用pH為7.2、10mmol/L?PBS緩沖液充分透析，在透析后的結(jié)合物溶液中加入等體積的甘油，-20℃以下保存；標(biāo)記好的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體酶結(jié)合物可用20％胎牛血清稀釋液稀釋至工作濃度，置于4℃保存至有效期，胎牛血清稀釋液為pH為7.4、20mmol/L?PBST溶液，內(nèi)含20％胎牛血清、1～10％蔗糖、0.01％食品紅；

步驟四，制備分析緩沖液，分析緩沖液為pH7.4、10mmol/L?PBST緩沖液，內(nèi)含1％BSA、1％防腐劑；

步驟五，制備濃縮洗滌液，濃縮洗滌液為pH7.2-7.4、20mmol/L?PBS緩沖液，內(nèi)含1％吐溫；

步驟六，組裝脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，將標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品、包被載體、酶標(biāo)記物、顯色液、分析緩沖液及濃縮洗滌液組裝成脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。