[發(fā)明專利]一種富集與檢測低濃度蒽醌類有效成分的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410263538.1
• 申請日: 2014-06-13
• 公開（公告）號: CN104090036A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曹君;胡帥帥;曹婉;龐瀟卿
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州師范大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/08
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王曉普

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于天然藥物提取及檢測領(lǐng)域。它涉及一種中藥及其生物樣本的提取及檢測方法，具體地說，它涉及由四氧化三鐵磁性石墨烯(rGOFe₃O₄)作為吸附劑，用來提取低濃度中藥大黃及其生物樣本(鼠尿)樣品中蒽醌類有效成分并檢測其含量的新方法。

背景技術(shù)

在天然產(chǎn)物生物樣本的檢測中，樣品預(yù)處理在整個實驗流程中至關(guān)重要。通過樣品的預(yù)處理，目標分子從復(fù)雜的生物基質(zhì)中得以提取，可以排除生物基質(zhì)對分析結(jié)果的干擾。更為重要的是，在樣品預(yù)處理的富集環(huán)節(jié)，可通過一系列技術(shù)手段將目標分子濃縮，提高了實驗的靈敏度，從而實現(xiàn)降低檢測限這一目的。

目前，中藥生物樣本的分析方法層出不窮。在其提取富集環(huán)節(jié)，主要以液-液萃取和固相萃取為代表，此外還包括蛋白沉淀、微透析等。而固相萃取(Solid-Phase?Extraction，簡稱SPE)，作為近年發(fā)展起來一種樣品預(yù)處理技術(shù)，與傳統(tǒng)的液-液萃取法相比，分析物的回收率更高，分析物與干擾組分的分離更有效，操作簡單、省時、省力。廣泛地應(yīng)用在醫(yī)藥、食品、環(huán)境、商檢、化工等領(lǐng)域。當然，柱形固相萃取也有其局限性：截面積小、流量低、易堵塞、易產(chǎn)生縫隙降低提取效率、重復(fù)性差等。

鑒于上述局限，諸多建立在液-液萃取和固相萃取基礎(chǔ)上的新型提取富集方法，也如雨后春筍般應(yīng)運而生。包括分散液相微萃取、單滴液相微萃取、中空纖維液相微萃取、基質(zhì)分散固相萃取、分子印跡固相萃取、磁性固相萃取等。相比傳統(tǒng)的液-液萃取和固相萃取，這類新型富集方法具有的優(yōu)勢也更為明顯，例如使用有機溶劑量少、富集倍數(shù)明顯、富集時間短等。其中具有代表性的就有磁性固相萃取(MSPE)。

所謂磁性固相萃取(MSPE)是近年來國內(nèi)外研究的一個熱點領(lǐng)域。與常規(guī)的固相萃取(SPE)柱填料相比，MSPE是一種以磁性或可磁化的材料作吸附劑基質(zhì)的一種固相萃取技術(shù)，在MSPE過程中，磁性吸附劑不直接填充到吸附柱中，而是被添加到樣品的溶液或懸浮液中，將目標分析物吸附到分散的磁性吸附劑表面，在外部磁場作用下，只需使用少量的吸附劑和較短的平衡時間就能實現(xiàn)萃取分離。

磁性固相萃取的核心因素是磁性吸附劑。吸附劑種類的選擇將直接影響實驗效果。近年來的磁性納米材料也是日新月異。目前選作磁性固相萃取的吸附劑通常包括：磁性碳材料、磁性分子印跡材料、金屬-有機框架材料等。四氧化三鐵磁性石墨烯(rGOFe₃O₄)這種納米材料更是受到諸多專家學(xué)者的青睞。該材料同時具備了氧化石墨烯和四氧化三鐵的優(yōu)異特性：既具備了氧化石墨烯的多孔、比表面積大等優(yōu)越的吸附特性，又具備了四氧化三鐵的磁性。這就使得該材料在諸多領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。

大黃(Radixetrhizoma?Rhei)為蓼科植物掌葉大黃(Rheum?Palmatum?L)，唐古特大黃(Rheum?tanguticum?Maxim.ex?Balf)或藥用大黃(Rheum?officinale?Baill)的干燥根和根莖。大黃在中藥復(fù)方中應(yīng)用相當廣泛，有“瀉熱通暢、涼血解毒、攻積導(dǎo)滯、利膽退黃、逐瘀通經(jīng)”之功效，《神農(nóng)本草經(jīng)》稱大黃“主下瘀血、血閉、寒熱、破癥瘕積聚、留飲、宿食、蕩滌腸胃、通利水谷、調(diào)中化食、安和五藏”。隨著人們對大黃的研究日益加深，各類活性成分相繼被發(fā)現(xiàn)。大黃中的有效成分有蒽醌類、芪類、苯丁酮類、有機酸、甾醇、鞣質(zhì)類、色原酮類等多種成分，起主要療效的是大黃中含有的蒽醌類成分。具有代表性的蒽醌類成分主要有蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚。在諸多學(xué)者對大黃開展的研究中，以磁性固相萃取作為預(yù)處理，并且結(jié)合超高效快液相-四級桿飛行時間液質(zhì)聯(lián)用儀(UHPLC-Q-TOF/MS)作為其檢測手段的案例尚未見報道。

截止目前，以四氧化三鐵磁性石墨烯(rGOFe₃O₄)作為吸附劑在中藥及其生物體液的磁性固相萃取方面應(yīng)用偏少。該方法在中藥或其生物樣本的提取、富集環(huán)節(jié)尚未見報道，對于中藥大黃這一研究領(lǐng)域更是一片空白。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于尋求一種比以往更加快速靈敏的提取檢測技術(shù)，使其應(yīng)用于大黃藥材稀釋液及其生物樣品的提取檢測。發(fā)明要點在于將磁性納米材料制備成為納米分散液，并應(yīng)用在磁性固相萃取領(lǐng)域，巧妙地結(jié)合了磁性富集技術(shù)和固相萃取技術(shù)。磁性納米材料分散液作為吸附劑與大黃藥材或其生物體液中的目標分子吸附結(jié)合，使得目標分子快速提取、富集。最終可以達到360-924倍的富集效果。