[發(fā)明專利]特異響應(yīng)逆境信號(hào)的nfiS基因的用途及其使用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410262604.3
• 申請(qǐng)日: 2014-06-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104046635B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 燕永亮;戰(zhàn)崳華;鄧志平;陸偉;林敏;張新雄;王亞君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所;東莞市保得生物工程有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/31
• 分類號(hào): C12N15/31;C12N1/21;C12N15/63;C12R1/38;C12R1/19
• 代理公司: 北京馳納智財(cái)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11367
• 代理人: 孫海波

1.一種特異響應(yīng)逆境信號(hào)的nfiS基因的用途，所述nfiS基因用于提高菌株氧化脅迫抗性和/或鹽脅迫抗性，所述nfiS基因是經(jīng)核苷酸序列為SEQ ID NO:1的DNA轉(zhuǎn)錄而成的非編碼RNA基因，所述菌株為固氮施氏假單胞菌或大腸桿菌及其衍生菌株。

2.一種利用nfiS基因提高菌株氧化脅迫抗性和/或鹽脅迫抗性的方法，包括克隆完整的nfiS基因的DNA片段序列和構(gòu)建具有氧化脅迫抗性和/或鹽脅迫抗性的重組菌株的步驟，所述nfiS基因是經(jīng)核苷酸序列為SEQ ID NO:1的DNA轉(zhuǎn)錄而成的非編碼RNA基因，所述菌株為固氮施氏假單胞菌或大腸桿菌及其衍生菌株。

3.如權(quán)利要求2所述的利用nfiS基因提高菌株氧化脅迫抗性和/或鹽脅迫抗性的方法，其特征在于，所述克隆完整的nfiS基因的DNA序列包括從施氏假單胞菌基因組中通過(guò)PCR擴(kuò)增出完整的nfiS基因的DNA片段序列。

4.如權(quán)利要求2所述的利用nfiS基因提高菌株氧化脅迫抗性和/或鹽脅迫抗性的方法，其特征在于，所述構(gòu)建具有氧化脅迫抗性和/或鹽脅迫抗性的重組菌株的步驟為：

（1）將克隆出的完整的nfiS基因的DNA片段序列進(jìn)行酶切；

（2）將酶切后的nfiS基因的DNA片段序列插入到表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)處；

（3）將步驟（2）中的載體通過(guò)熱激轉(zhuǎn)化的方法轉(zhuǎn)化到菌株中，構(gòu)建重組表達(dá)菌株，即具有氧化脅迫抗性和/或鹽脅迫抗性的重組菌株。

5.如權(quán)利要求4所述的利用nfiS基因提高菌株氧化脅迫抗性和/或鹽脅迫抗性的方法，其特征在于，所述酶切是用BamHI和HindIII內(nèi)切酶進(jìn)行雙酶切。

6.如權(quán)利要求4所述的利用nfiS基因提高菌株氧化脅迫抗性和/或鹽脅迫抗性的方法，其特征在于，所述表達(dá)載體是pLAFR3載體。

7.如權(quán)利要求4所述的利用nfiS基因提高菌株氧化脅迫抗性和/或鹽脅迫抗性的方法，其特征在于，在步驟（2）中，還包括在表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)處插入驗(yàn)證基因。

8.如權(quán)利要求7所述的利用nfiS基因提高菌株氧化脅迫抗性和/或鹽脅迫抗性的方法，其特征在于，包含所述驗(yàn)證基因的重組表達(dá)載體為四環(huán)素抗性。

9.一種根據(jù)權(quán)利要求2-8中的任意一項(xiàng)所述的利用nfiS基因提高菌株氧化脅迫抗性和/或鹽脅迫抗性的方法構(gòu)建的重組菌株。