[發(fā)明專利]檢測哮喘易感基因ADRB2突變位點的探針和方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410262409.0
• 申請日: 2014-06-12
• 公開（公告）號: CN104017878A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張昕;張麗;李凡
• 申請（專利權(quán)）人: 山西大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 山西五維專利事務(wù)所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及檢測哮喘易感基因ADRB2突變位點的專用探針、引物、基因芯片和方法。

背景技術(shù)

哮喘是一種常見的氣道的慢性炎癥性疾病，到2011年調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，全球有2.35億至3億人受到影響，大約25萬人因此失去生命。這一大規(guī)模爆發(fā)的流行病具有明顯的遺傳傾向，有一定的家族聚集性，哮喘的發(fā)生是環(huán)境中過敏原和自身易感性共同作用結(jié)果。本發(fā)明選取了一個與哮喘發(fā)生關(guān)聯(lián)度較大的基因，并對其進行多態(tài)性檢測。這個基因的生理功能和哮喘關(guān)聯(lián)分別解釋如下：

ADRB2這一基因編碼Beta2型腎上腺素受體。它是交感神經(jīng)系統(tǒng)的重要組成部分，調(diào)節(jié)包括心率、血管緊張性、腎臟的水鈉排泄和潴留以及脂肪分解等多種生理代謝活動。哮喘的發(fā)生與氣道平滑肌緊張密切相關(guān)，ADRB2基因編碼的β2腎上腺素受體以兒茶酚胺為內(nèi)源性配體，主要通過第二信使cAM調(diào)節(jié)平滑肌的緊張性。ADRB2基因的多態(tài)性導(dǎo)致調(diào)節(jié)平滑肌緊張性能力的改變，進而影響哮喘的易感性。

傳統(tǒng)的直接測序法檢測基因突變位技術(shù)，檢測儀器昂貴，體系設(shè)計復(fù)雜，重復(fù)性差；而其他如熒光定量PCR檢測技術(shù)，靈敏度較低，檢測結(jié)果易產(chǎn)生誤差。基因芯片技術(shù)是一種新興的DNA檢測技術(shù)，具有高通量、高靈敏度、高特異性等特點，能在短時間內(nèi)獲得大量的基因信息。目前基因芯片已經(jīng)在癌癥診斷等方面取得了一些應(yīng)用，然而對于哮喘易感基因突變位點的檢測仍處于初步開發(fā)階段。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種檢測哮喘易感基因ADRB2突變位點的專用探針、引物、基因芯片和方法。

本發(fā)明提供的一種檢測哮喘易感基因ADRB2的突變位點的專用探針，其是核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO.4和SEQ?ID?NO.5所示的DNA片段的混合物，或者是核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO.4和SEQ?ID?NO.5所示序列的反向互補序列的DNA片段的混合物。

上述探針檢測哮喘易感基因ADRB2的突變位點的靶序列是核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO.1所示的DNA片段，或者是核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO.1所示序列的反向互補序列的DNA片段。

本發(fā)明提供的一種檢測哮喘易感基因ADRB2的突變位點的基因芯片，其含有如前所述的專用探針。

本發(fā)明提供的一種檢測哮喘易感基因ADRB2的突變位點的裝置，其包括如前所述的專用探針，或者包括含有專用探針的DNA芯片。所述的裝置還包括引物對，所述的引物對中，一條引物的核苷酸序列如序列表中的SEQ?ID?NO.2，另一條引物的核苷酸序列如序列表中的SEQ?ID?NO.3所示。所述的引物對含有熒光標記。

本發(fā)明提供的檢測哮喘易感基因ADRB2的突變位點的引物，其是核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO.2或SEQ?ID?NO.3所示的DNA片段。優(yōu)選所述的引物上含有熒光標記。

本發(fā)明提供的一種檢測哮喘易感基因ADRB2的突變位點的方法，包括以下步驟：

(1)制備待測樣本的總DNA，作為模板，用含檢測標記的引物對進行PCR擴增，獲得PCR產(chǎn)物，所述的引物對中，一條引物的核苷酸序列如序列表中的SEQ?ID?NO.2，另一條引物的核苷酸序列如序列表中的SEQ?ID?NO.3所示；

(2)將專用探針結(jié)合于基因芯片的片基上，洗去未結(jié)合的探針，獲得檢測哮喘易感基因ADRB2的突變位點的基因芯片，所述的專用探針是核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO.4和SEQ?ID?NO.5所示的DNA片段的混合物，或者是核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO.4和SEQ?ID?NO.5所示序列的反向互補序列的DNA片段的混合物；

(3)在步驟(2)所得的檢測哮喘易感基因ADRB2的突變位點的基因芯片中加入步驟(1)所得的PCR產(chǎn)物，進行雜交，洗去未雜交的PCR產(chǎn)物；

(4)檢測步驟(3)所得的雜交后的基因芯片。

其中，步驟(1)所述的制備待測樣本的總DNA的方法是常規(guī)的。所述PCR的擴增方法也是常規(guī)的，較佳的PCR擴增程序如下：95℃預(yù)熱5min；35個循環(huán)：95℃30s，55℃30s，72℃30s；最后72℃延伸5min。