[發(fā)明專利]一種解脂耶氏酵母W29脂肪酶的分離純化方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410260583.1
• 申請(qǐng)日: 2014-06-12
• 公開（公告）號(hào): CN104059895A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳蘭;葛剛;張小琴;周興濤;余祥單;劉以珍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/20
• 分類號(hào): C12N9/20;C12R1/645
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種解脂耶氏酵母W₂₉脂肪酶的分離純化方法，其特征在于：所述方法的具體步驟如下：

(1)往含有解脂耶氏酵母W₂₉脂肪酶的發(fā)酵上清液中加入含有EDTA的飽和硫酸銨溶液，使其終飽和度為30-55％，然后調(diào)節(jié)pH至4.5-6.5，在冰上放置10h后，進(jìn)行離心得到沉淀；

(2)將步驟(1)得到的沉淀，進(jìn)行透析除鹽，得到粗酶液；

(3)將步驟(2)得到的粗酶液進(jìn)行低速離心，然后通過DEAE-SepharoseFF凝膠過濾層析，然后收集洗脫液，將洗脫液經(jīng)PEG20000濃縮后，與甘油混合，放入-20℃下保存。

2.如權(quán)利要求1所述的解脂耶氏酵母W₂₉脂肪酶的分離純化方法，其特征在于：

步驟(1)中，EDTA在溶液中的最終濃度為1mM。

3.如權(quán)利要求1所述的解脂耶氏酵母W₂₉脂肪酶的分離純化方法，其特征在于：

步驟(1)中，硫酸銨溶液的終飽和度為45％。

4.如權(quán)利要求1所述的解脂耶氏酵母W₂₉脂肪酶的分離純化方法，其特征在于：

步驟(1)中，使用硫酸或氨水調(diào)節(jié)pH值。

5.如權(quán)利要求1所述的解脂耶氏酵母W₂₉脂肪酶的分離純化方法，其特征在于：

步驟(1)中，調(diào)節(jié)pH至6.0。

6.如權(quán)利要求1所述的解脂耶氏酵母W₂₉脂肪酶的分離純化方法，其特征在于：

步驟(1)中，離心是在4℃、14000r/min下離心15min后取沉淀。

7.如權(quán)利要求1所述的解脂耶氏酵母W₂₉脂肪酶的分離純化方法，其特征在于：

步驟(2)中，透析除鹽的步驟是，將步驟(1)得到的沉淀加入透析袋內(nèi)，加入的總量為透析袋容積的1/2-2/3，用透析夾夾緊倒置，按沉淀與緩沖液體積比為1:30，小心將上述加樣密封的透析袋放入4℃預(yù)冷的25mMpH7.5Tris-HCL緩沖液中，4℃慢速攪拌透析系統(tǒng)，4h換一次透析緩沖液，共換3次。

8.如權(quán)利要求1所述的解脂耶氏酵母W₂₉脂肪酶的分離純化方法，其特征在于：步驟(3)中，洗脫液經(jīng)PEG20000濃縮后，與甘油按體積比1:1混合。